發(fā)布時間：2018-02-05 05:50

  本文關鍵詞： 電磁輻射 皮層神經(jīng)元 Ca~(2+) TRPC VGCC　出處：《第三軍醫(yī)大學》2015年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：研究背景和目的:隨著科技的發(fā)展和人們生活水平的不斷提高,個人移動通訊設備被廣泛使用,射頻電磁輻射(RF-EMF)可能帶來的種種不良效應和安全隱患越來越被大眾所關注。研究表明,神經(jīng)系統(tǒng)是電磁輻射暴露受累的重要靶點,而神經(jīng)元Ca2+調節(jié)失衡與多種神經(jīng)系統(tǒng)損害相關,因此射頻電磁輻射與鈣平衡的關系研究已成為近年來該研究領域關注的方向。射頻電磁輻射引起細胞內(nèi)鈣調節(jié)失衡的報道很多,但射頻電磁輻射誘導鈣失衡的完整機制還不清楚,在神經(jīng)元細胞膜鈣離子通道途徑研究射頻輻射致胞內(nèi)鈣失衡的機制報道甚少。為此,本研究擬從瞬時受體電位C(TRPC)通道和電壓門控通道(VGCC)途徑,探討RF-EMF對神經(jīng)元鈣平衡的影響和發(fā)生機制,以期為電磁輻射致神經(jīng)損害的機制研究提供更多線索和參考。方法:(1)原代培養(yǎng)皮層神經(jīng)元(PCCNs)和分組:原代皮層神經(jīng)元取自0-3天齡新生大鼠大腦,胰酶消化后培養(yǎng)8天進行實驗。實驗分組:假暴露組、電磁輻射暴露組、假暴露+SKF-96365處理組、電磁輻射暴露+SKF-96365處理組。SKF-96365為TRPC通道阻斷劑。(2)神經(jīng)元電磁輻照暴露模型:暴露系統(tǒng)為sXc-1800,頻率1800 MHz,比吸收率4 W/kg,5min開、10 min關,連續(xù)暴露。(3)RF-EMF暴露后神經(jīng)元死亡率和活力檢測:采用LDH和CCK-8試劑盒,分別檢測暴露結束時和結束后24 h PCCNs的死亡率和活力。(4)RF-EMF暴露對神經(jīng)元突起生長影響觀察:β-III微管蛋白(Tuj-1)免疫熒光染色,激光共聚焦顯微鏡檢測RF-EMF暴露后神經(jīng)元突起生長狀況,并通過在暴露前加入TRPC通道阻斷劑SKF-96365預處理,觀察比較阻斷TRPC通道后RF-EMF暴露對神經(jīng)元突起生長的影響。(5)TRPC1、TRPC3蛋白表達檢測:采用Western blot檢測RF-EMF暴露12、24、48 h PCCNs中TRPC1、TRPC3通道蛋白表達水平。(6)檢測[Ca2+]i變化:Fluo-4 AM染色,共聚焦顯微鏡測RF-EMF暴露24 h結束時,PCCNs鈣庫操縱性鈣內(nèi)流(SOCE)和K+誘導鈣內(nèi)流的變化。(7)膜片鉗全細胞技術vgcc電流檢測:rf-emf暴露24h結束時,施加不同電壓激活通道開放,全細胞模式記錄pccnsvgcc電流。結果:(1)rf-emf暴露結束時和結束后24h,輻照組pccns死亡率和活力檢測結果與相應對照組相比均無顯著差異(p0.05)。說明本實驗中的電磁輻射劑量未對神經(jīng)元存活和活力造成明顯影響,可作為后續(xù)實驗研究的電磁暴露模型。(2)rf-emf暴露24h,pccns中trpc1和trpc3蛋白表達分別降低24%和23%,且與對照組相比有統(tǒng)計學意義(p0.05)。說明trpc通道蛋白表達受抑,由此可能造成通道功能受損。(3)skf-96365處理可使假暴露組pccnssoce下降24%,rf-emf暴露24h,pccns的soce下降54%,兩者與對照組比差異均有統(tǒng)計學意義(p0.05)。rf-emf暴露+skf-96365聯(lián)合處理組soce下降20%,該變化與單純rf-emf暴露組比較差異無統(tǒng)計學意義(p0.05)。說明加入skf-96365并未有效增強rf-emf暴露引起的soce下降效應,間接提示rf-emf引起trpc通道介導鈣內(nèi)流途徑受損參與rf-emf對神經(jīng)元soce的抑制。(4)rf-emf暴露48h可引起pccns突起總長度、初級突起數(shù)和分支數(shù)分別下降20%、12%、31%,與假暴露組相比有統(tǒng)計學意義(p0.05)。假暴露skf-96365處理組,突起總長度、初級突起數(shù)、分支數(shù)分別下降10%、12%、24%,與假暴露組比較變化均有統(tǒng)計學意義(p0.05),而暴露skf-96365聯(lián)合處理組突起總長度、突起數(shù)、分支數(shù)的變化與暴露組比較差異無統(tǒng)計學意義(p0.05)。說明rf-emf暴露引起pccnstrpc通道受損造成的鈣平衡失調,可引起神經(jīng)元突起生長受抑。(5)rf-emf暴露24h,不同電壓誘導的高閾值激活vgcc電流大小和電流密度與假暴露組相比,差異沒有顯著意義(p0.05)。說明本實驗模型下rf-emf暴露對pccnsvgcc的激活未見影響。(6)rf-emf暴露24h,k+誘導的pccns鈣內(nèi)流升高與假暴露組相比降低了26%,且有統(tǒng)計學差異(p0.05)。加入tg處理后,k+誘導的神經(jīng)元鈣內(nèi)流升高與假暴露組相比沒有顯著差異(p0.05)。說明rf-emf暴露對vgcc介導鈣內(nèi)流的功能沒有影響,但對胞內(nèi)調控鈣內(nèi)流通路有影響。結論:在本實驗電磁輻射暴露模型下,rf-emf連續(xù)暴露24h,造成trpc1、trpc3蛋白表達降低,導致神經(jīng)元soce減少,神經(jīng)元鈣動力特性改變;本實驗模型下未觀察到rf-emf暴露24h對高閾值激活vgcc電流特性和vgcc介導鈣內(nèi)流功能的影響,但是會通過對胞內(nèi)調控鈣內(nèi)流途徑的影響,造成K+誘導的神經(jīng)元鈣動力特性改變。我們發(fā)現(xiàn),在RF-EMF對TRPC和VGCC途徑影響的研究中,均觀察到了PCCNs鈣動力特性的改變,雖然引起的途徑不同,但這可能就是造成原代皮層神經(jīng)元突起生長減緩的影響機制之一。
[Abstract]:Objective : To investigate the effects of RF - EMF on neuronal calcium homeostasis and to investigate the effects of RF - EMF on neuronal calcium homeostasis . ( 5 ) The expression of TRPC1 , TRPC3 protein was detected by Western blot . The expression level of TRPC1 and TRPC3 was detected by Western blot . ( 6 ) The expression of trpc1 and trpc3 protein in pccns decreased by 24 % and 23 % after exposure to RF - emf . ( 4 ) The effect of rf - emf exposure on the activation of pccnsvgcc was not significant ( p . 05 ) . The effect of rf - emf exposure on the activation of pccnsvgcc was not significant ( p . 05 ) .

【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R594.8

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本文編號：1492306