本文關(guān)鍵詞：強(qiáng)直性脊柱炎TCR二次重排及BV CDR3譜型和分子特征初步研究

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【摘要】：目的:通過(guò)分析對(duì)AS患者外周血CD4+、CD8+T細(xì)胞TCR BV CDR3譜型多樣性特點(diǎn)及檢測(cè)TCR二次重排的相關(guān)基因,探討TCR CDR3氨基酸序列和TCR二次重排與AS發(fā)病的相關(guān)性,為AS中T細(xì)胞致病機(jī)制的研究和個(gè)性化治療提供一條新的途徑。方法:(1)免疫磁珠法分離AS患者與健康對(duì)照組外周血中的CD4+、CD8+淋巴細(xì)胞。(2)提取各樣本總RNA并按RT-PCR Kit操作說(shuō)明書(shū)逆轉(zhuǎn)錄合成c DNA。(3)參照文獻(xiàn)設(shè)計(jì)并合成TCR BV亞家族及實(shí)驗(yàn)對(duì)照引物,RT-PCR法擴(kuò)增各樣本TCR亞家族,并用2%瓊脂凝膠電泳鑒定PCR產(chǎn)物。(4)免疫掃描技術(shù)分析PCR產(chǎn)物,并用將單/寡克隆基因進(jìn)行測(cè)序,分析AS患者CD4+、CD8+TCR BV家族CDR3區(qū)譜系多態(tài)性及克隆性的特點(diǎn)(5)RT-PCR法檢測(cè)各樣本RAG1、RAG2、Td T、Ku70、Ku80表達(dá)情況,同時(shí)檢測(cè)TCR重排過(guò)程中間產(chǎn)物BD2-BJ2重排刪除環(huán)。結(jié)果:(1)健康對(duì)照組及AS患者CD4+、CD8+TCR BV各家族PCR產(chǎn)物在2%瓊脂糖凝膠電泳圖顯示,各家族均有表達(dá)。正常健康人CD4+、CD8+TCR BV亞家族免疫掃描均呈正態(tài)分布。(2)12例AS患者CD4+TCR BV家族絕大多數(shù)呈現(xiàn)與健康對(duì)照相似的正態(tài)分布的鐘型峰圖,僅少數(shù)家族呈不規(guī)則異常峰型或偏峰,極少家族出現(xiàn)寡克隆趨勢(shì),僅2例患者各出現(xiàn)1個(gè)單克隆家族單峰。不同患者的CD4+TCR BV家族異常峰型率在4%(1/26)~27%(7/26),異常率出現(xiàn)較高的家族有BV 2和BV 3均為75%(9/12),BV 19為50%(6/12),異常率較低的家族為BV 9和BV 13.2均為8.3%(1/12)。(3)12例AS患者CD8+TCR BV家族大多數(shù)呈現(xiàn)非正態(tài)異常峰型,其中7例患者CD8+TCR BV家族異常分型率高于50%以上,明顯多于CD4+T細(xì)胞。AS患者CD8+TCR BV 26個(gè)亞家族均出現(xiàn)異常峰率,其中異常率較高的家族為BV 3和BV 19均為83%(10/12),異常率較低的家族為BV 8為17%(2/12)。(4)同一患者出現(xiàn)不同BV亞家族單克隆增生,其TCR BV CDR3區(qū)長(zhǎng)度和序列有所不同。同一BV亞家族在不同患者其CDR3區(qū)長(zhǎng)度和序列也不相同。顯示同時(shí)存在一些共同基序。(5)6例AS患者治療前后CD8+TCR BV亞家族異常率均高于治療前后CD4+T細(xì)胞,其中3例患者治療后CD4+TCR BV亞家族異常率下降,4例患者CD8+TCR BV亞家族異常率均下降。(6)20例健康對(duì)照、病例對(duì)照組及AS患者RAG1、RAG2、Td T、Ku70、Ku80PCR產(chǎn)物在2%瓊脂糖凝膠電泳圖顯示,AS患者、正常健康對(duì)照組均表達(dá)Ku70;8例AS患者、3例正常健康檢測(cè)到Ku80的特異性條帶。其他條帶未檢測(cè)出。(7)16例正常對(duì)照檢出BD1-BJl sj TRECs S1,AS患者均未檢出sj TRECs。結(jié)論:(1)AS患者CD4+、CD8+TCR BV CDR3譜系存在顯著多態(tài)性,CD8+T細(xì)胞在AS患者的免疫發(fā)病機(jī)制中占據(jù)主導(dǎo)地位。(2)AS患者治療前后CD4+、CD8+TCR BVCDR3譜系的監(jiān)測(cè),有可能成為了解患者病情進(jìn)展?fàn)顩r,間接反映療效和預(yù)后的一種新的有效技術(shù)手段。(3)AS患者外周TCR不存在二次重排,AS患者TCR BV家族的異常改變可能并非由TCR二次重排而形成。
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R593.23

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本文編號(hào)：1235059