本文關(guān)鍵詞：尖風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎潛在生物標(biāo)志物的篩選與分子功能機(jī)制研究

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【摘要】：類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)是一種以關(guān)節(jié)病變?yōu)橹鞯穆匀硐到y(tǒng)性自身免疫性疾病,由于其不可根治和致殘率高等特點(diǎn),嚴(yán)重危害公眾健康,增加社會(huì)負(fù)擔(dān)。目前對(duì)該疾病還沒(méi)有良好的預(yù)測(cè)、診斷生物標(biāo)志物和治療靶標(biāo),大大加重了該疾病的疾病負(fù)擔(dān)和社會(huì)醫(yī)療資源的消耗,因此尋找有效的RA潛在生物標(biāo)志物勢(shì)在必行。然而RA的發(fā)病機(jī)制尚未明確,但主要是有遺傳和環(huán)境兩方面因素共同作用而成,且目前已發(fā)現(xiàn)的RA易感基因可以解釋該病60%的易感性,所以從易感基因開(kāi)始著手,深入探討其分子功能機(jī)制,探尋其中存在的潛在生物標(biāo)志物已成為當(dāng)前對(duì)RA研究的重中之重。鑒于此,我們進(jìn)行了類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎潛在生物標(biāo)志物的篩選與分子功能機(jī)制研究,研究主要分為兩部分內(nèi)容:第一部分,運(yùn)用多數(shù)據(jù)庫(kù)整合分析策略在RA多種功能細(xì)胞和組織之間尋找共享的生物標(biāo)記;第二部分,運(yùn)用整合實(shí)驗(yàn)分析策略探尋RA易感基因分子功能機(jī)制,挖掘潛在的可以預(yù)測(cè)RA或判別高危易感人群的生物標(biāo)志物。第一部分目的:應(yīng)用多數(shù)據(jù)庫(kù)合并整合分析策略從多種RA功能細(xì)胞或組織中尋找潛在的共享生物標(biāo)志物。材料與方法:從NCBI GEO數(shù)據(jù)庫(kù)中篩選符合我們研究要求的多種RA相關(guān)細(xì)胞或組織的基因表達(dá)芯片研究,統(tǒng)計(jì)分析包括邊際分析和聯(lián)合分析用以尋找各數(shù)據(jù)集之間顯著的共享基因,隨后的整合分析包括功能注釋聚類(lèi)分析、蛋白質(zhì)交互作用分析、以基因?yàn)閱挝坏年P(guān)聯(lián)分析和內(nèi)部樣本的血漿ELISA實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。結(jié)果:我們的研究應(yīng)用于7個(gè)數(shù)據(jù)集,2個(gè)滑膜組織、1個(gè)滑膜巨噬細(xì)胞、1個(gè)滑液?jiǎn)蝹�(gè)核細(xì)胞、2個(gè)外周血單個(gè)核細(xì)胞以及1個(gè)外周全血細(xì)胞。多數(shù)據(jù)集統(tǒng)計(jì)分析篩選出18個(gè)候選共享基因,主要涉及免疫反應(yīng)和趨化因子通路等。在這18個(gè)基因中有8個(gè)基因(PPBP、PF4、HLA-F、S100A8、RNASEH2A、P2RY6、JAG2和PCBP1)和現(xiàn)已被證實(shí)和RA相關(guān)的基因之間有交互聯(lián)系。其中2個(gè)基因(HLA-F和PCBP1)在以基因?yàn)閱挝坏年P(guān)聯(lián)分析中具有顯著差異(P=1.03E-31;P=1.30E-2),此外,PCBP1在我們內(nèi)部樣本的血漿EILISA實(shí)驗(yàn)中也表現(xiàn)出了較正常人的顯著性差異(P=2.60E-2)。結(jié)論:本研究代表了在多種RA相關(guān)功能細(xì)胞或最終中尋找共享生物標(biāo)記的第一次嘗試,結(jié)果顯示,PCBP1很有可能是RA新的潛在生物標(biāo)志物。第二部分目的:利用公共數(shù)據(jù)庫(kù)資源,采用整合實(shí)驗(yàn)策略探索RA易感基因的分子功能機(jī)制,在SNP層次挖掘潛在的RA預(yù)測(cè)生物標(biāo)志物。材料與方法:基于對(duì)RA研究現(xiàn)有的公共數(shù)據(jù)庫(kù)及前人研究結(jié)果,對(duì)RA易感位點(diǎn)進(jìn)行整合分析篩選,同時(shí)滿足GWAS研究與RA顯著、位點(diǎn)有mi RNA結(jié)合以及位點(diǎn)具有順式e QTL效應(yīng)的SNP被初步選出,隨后進(jìn)行文獻(xiàn)搜索及綜合分析篩選出潛在的功能位點(diǎn)進(jìn)行AEI和雙熒光素酶報(bào)告基因進(jìn)行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。結(jié)果:本研究經(jīng)DNA、mi RNA和m RNA三層數(shù)整合分析共篩選出166個(gè)和RA相關(guān)的功能位點(diǎn),按照我們實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的篩選標(biāo)準(zhǔn)及綜合文獻(xiàn)分析,最終確定rs907091為研究目標(biāo)位點(diǎn),隨后的AEI實(shí)驗(yàn)在活體內(nèi)證明了該位點(diǎn)由CT會(huì)導(dǎo)致其所在基因IKZF3的表達(dá)量降低,雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)則在體外證明了其分子機(jī)制是由于mi R-326和mi R-330-5p與突變后m RNA作用,降解其產(chǎn)量。IKZF3蛋白產(chǎn)物的減少,直接影響其對(duì)T和B淋巴細(xì)胞增殖、分化和凋亡的調(diào)控,導(dǎo)致免疫細(xì)胞活性增強(qiáng),分泌大量趨化因子及細(xì)胞因子,導(dǎo)致RA全身系統(tǒng)性炎癥反應(yīng)及關(guān)節(jié)癥狀。結(jié)論:通過(guò)整合多維度遺傳學(xué)數(shù)據(jù)和利用文獻(xiàn)搜索以及功能實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證的方法,我們發(fā)現(xiàn)位于17號(hào)染色體IKZF3基因3’UTR區(qū)域的SNP位點(diǎn)rs907091可以通過(guò)mi RNA作用機(jī)制調(diào)控目標(biāo)基因表達(dá),進(jìn)而影響RA的發(fā)病過(guò)程,該位點(diǎn)基因分型信息可為預(yù)測(cè)RA的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)以及判別易感人群提供有力幫助。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R593.22

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