本文關(guān)鍵詞：糖尿病對小鼠腹主動脈瘤組織蛋白酶S及胱抑素C表達的影響

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【摘要】：研究目的大量的流行病學(xué)證據(jù)表明,糖尿病是腹主動脈瘤(abdominal aortic aneurysm,AAA)的保護性因素,其機制尚不明確。近年研究結(jié)果顯示,組織蛋白酶S(Cathepsin S)是導(dǎo)致腹主動脈瘤血管基質(zhì)重塑的關(guān)鍵因子之一,Cathepsin S及其內(nèi)源性抑制物胱抑素C (Cystatin C)在AAA的發(fā)病中發(fā)揮重要作用。AAA瘤壁內(nèi)Cathepsin S含量增高而胱抑素C缺乏,Cathepsin S能夠誘導(dǎo)主動脈細(xì)胞外基質(zhì)降解、平滑肌細(xì)胞凋亡、炎癥細(xì)胞聚集和微血管生成,最終促進AAA的產(chǎn)生和增長。然而糖尿病相關(guān)領(lǐng)域的研究卻發(fā)現(xiàn),糖尿病動物模型中Cathepsin S的表達及活性受到抑制,糖尿病人群的血漿Cystatin C水平也高于非糖尿病人群。這種相反作用能否是糖尿病對AAA的保護機制,目前暫缺乏研究。本實驗擬通過構(gòu)建糖尿病及AAA的小鼠模型,探討糖尿病對AAA組織中Cathepsin S 及 CystatinC表達的影響,以期尋找糖尿病對AAA的保護機制。研究方法將16只載脂蛋白E基因缺陷(ApoE-/-)的C57/BL6小鼠隨機分入AAA組和DM+AAA組并建立相應(yīng)動物模型。DM+AAA組小鼠連續(xù)5天腹腔注射鏈脲佐菌素溶液(50mg/kg)誘發(fā)糖尿病,AAA組腹腔注射等量緩沖液作為對照。21天后測血糖大于16.7mmol/L (300mg/dL)者視為糖尿病模型建立成功。隨后對兩組小鼠同時構(gòu)建AAA模型,應(yīng)用植入式膠囊滲透壓泵將血管緊張素Ⅱ以1000ng·kg-1·min-1的速度持續(xù)灌注28天。灌注前后分別通過B超測量最大腹主動脈直徑,腹主動脈直徑增大1.5倍者視為腹主動脈瘤模型建立成功。AAA造模成功后處死小鼠,并采集小鼠血漿及AAA組織標(biāo)本。通過酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)匕較兩組小鼠Cystatin C的血漿水平差異。通過實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)、蛋白質(zhì)印跡法(Western-Blotting)、免疫組化觀察兩組小鼠AAA組織中Cystatin C及Cathepsin S在mRNA水平和蛋白水平的表達差異。通過Weigert彈力纖維染色法觀察兩組小鼠AAA組織中彈力纖維的破壞程度。結(jié)果AAA造模前,DM+AAA組與AAA組的腹主動脈最大直徑無統(tǒng)計學(xué)差異(0.68±0.04mm vs 0.70±0.04mm). AAA造模后,DM+AAA組的腹主動脈瘤最大直徑明顯小于AAA組(1.13±0.14mm vs 1.35±0.26mm). ELISA結(jié)果顯示,DM+AAA組Cystatin C的血漿水平高于AAA組(1347.19±340.12pg/ml vs 1060.17±153.55pg/ml),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。qRT-PCR 和 Western-blotting結(jié)果顯示,與AAA組相比,DM+AAA組Cystatin C 在 mRNA和蛋白水平的表達均上調(diào),而Cathepsin S在nRNA和蛋白水平的表達均下調(diào),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。免疫組化結(jié)果顯示,Cystatin C在DM+AAA組瘤壁中的表達較AAA組增加,Cathepsin S在DM+AAA組瘤壁中的表達較AAA組降低,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義。Weigert彈力纖維染色結(jié)果顯示,與AAA組相比,DM+AAA組的彈力纖維斷裂數(shù)量明顯減少、破壞程度降低(2.00±0.76 vs 2.88±0.64),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論及意義本研究表明糖尿病能夠增高小鼠血漿及AAA組織中Cystatin C含量,并抑制AAA組織中Cathepsin S的表達,降低腹主動脈壁彈力纖維的破壞程度,從而抑制AAA的進展。這可能是糖尿病對AAA保護效應(yīng)的又一機制,同時強調(diào)了Cathepsin S在AAA發(fā)病機制中的重要作用。Cathepsin S可能成為AAA藥物治療的新靶點。
【關(guān)鍵詞】：腹主動脈瘤 糖尿病 組織蛋白酶S 胱抑素C
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R587.1
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-12
• 符號說明12-13
• 前言13-16
• 材料與方法16-30
• 結(jié)果30-31
• 討論31-34
• 結(jié)論34-35
• 附圖35-37
• 參考文獻37-40
• 綜述40-54
• 參考文獻46-54
• 致謝54-55
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文目錄55-56
• 學(xué)位論文評閱及答辯情況表56

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本文編號：1109736