本文關(guān)鍵詞：ROS-AKT-mTOR信號軸在高糖誘導(dǎo)MC3T3-E1成骨細(xì)胞自噬中的作用

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【摘要】：目的:探討高糖環(huán)境下ROS-AKT-mTOR信號軸在MC3T3-E1成骨細(xì)胞自噬和增殖、凋亡中的作用。方法:將體外培養(yǎng)的MC3T3-E1成骨細(xì)胞分為正常對照組、NAC組、11.0mmol/L葡萄糖組、11.0mmol/L葡萄糖+NAC組、22.0mmol/L葡萄糖組、22.0mmol/L葡萄糖+NAC組、CQ組、22.0mmol/L葡萄糖+CQ組。采用DCFH-DA探針試劑盒檢測細(xì)胞內(nèi)ROS水平;采用MTT法檢測細(xì)胞增殖;采用Annexin V-FITC/PI試劑盒處理不同組別MC3T3-E1成骨細(xì)胞,并應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率;采用Honchest33258染核,免疫熒光顯微鏡觀察細(xì)胞核形態(tài);應(yīng)用Western Blot和免疫熒光法檢測細(xì)胞內(nèi)蛋白表達(dá)。結(jié)果:(1)11.0mmol/L和22.0mmol/L葡萄糖組MC3T3-E1成骨細(xì)胞凋亡率較正常對照組均顯著增加(P0.01),且細(xì)胞凋亡率隨著葡萄糖濃度升高而增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(2)與正常對照組相比,11.0mmol/L葡萄糖組MC3T3-E1成骨細(xì)胞增殖輕微下降(P0.05),22.0mmol/L葡萄糖組MC3T3-E1成骨細(xì)胞增殖顯著降低(P0.01),且細(xì)胞增殖能力隨著葡萄糖濃度升高而降低。(3)與正常對照組相比,11.0mmo/L葡萄糖組MC3T3-E1成骨細(xì)胞LC3B-II和Beclin1蛋白表達(dá)顯著增加,P62蛋白表達(dá)顯著下降;22.0mmol/L葡萄糖組MC3T3-E1成骨細(xì)胞LC3B-II蛋白表達(dá)顯著下降(P0.01),Beclin1和P62蛋白表達(dá)增加(P0.01;P0.05)。與正常對照組相比,CQ組MC3T3-E1成骨細(xì)胞LC3B-II蛋白表達(dá)增加(P0.05)。與22.0mmol/L葡萄糖組和CQ組相比,22.0mmol/L葡萄糖+CQ組MC3T3-E1成骨細(xì)胞LC3B-II蛋白表達(dá)均顯著增加(P0.01)。(4)與正常對照組相比,11.0mmol/L和22.0mmol/L葡萄糖組MC3T3-E1成骨細(xì)胞胞內(nèi)ROS水平均顯著增加(P0.01),但無明顯濃度依賴性。NAC可顯著降低,MC3T3-E1成骨細(xì)胞胞內(nèi)ROS的生成,并改善高糖所致的凋亡增加、增殖下降和自噬水平上升。(5)與正常對照組相比,11.0mmol/L和22.0mmol/L葡萄糖組MC3T3-E1細(xì)胞p-AKT、p-mTOR蛋白表達(dá)下調(diào),NAC可上調(diào)MC3T3-E1成骨細(xì)胞p-AKT、p-mTOR蛋白表達(dá),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:(1)高糖環(huán)境下MC3T3-E1成骨細(xì)胞凋亡增加、增殖下降,且呈濃度依賴性。(2)高糖環(huán)境下MC3T3-E1成骨細(xì)胞自噬水平增加。(3)高糖可通過ROS-AKT-mTOR信號軸誘導(dǎo)MC3T3-E1成骨細(xì)胞自噬和凋亡,降低細(xì)胞增殖。
【關(guān)鍵詞】：自噬 凋亡 增殖 成骨細(xì)胞 ROS
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R587.2;R580
【目錄】：

• 符號說明4-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-13
• 1 材料與方法13-20
• 2 結(jié)果20-31
• 3 討論31-34
• 全文總結(jié)34-35
• 參考文獻(xiàn)35-39
• 文獻(xiàn)綜述39-49
• 參考文獻(xiàn)44-49
• 致謝49-50
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文50

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