本文關鍵詞：PAX2穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系構(gòu)建及對細胞遷移和侵襲能力的作用研究

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【摘要】：目的探討PAX2穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系構(gòu)建及生物學作用。方法選擇處于對數(shù)生長期大鼠腎小管上皮細胞,實驗分為穩(wěn)轉(zhuǎn)組、空載組、對照組。穩(wěn)轉(zhuǎn)組采用陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)導將p EGFP-PAX2轉(zhuǎn)入大鼠腎小管上皮細胞,空載組采用同樣方法配置空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染溶液,對照組不添加質(zhì)粒轉(zhuǎn)染溶液。經(jīng)G418篩選,建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞系。通過細胞劃痕實驗及Transwell實驗檢測PAX2穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系的細胞遷移率及細胞侵襲作用。結(jié)果應用G418篩選14 d,穩(wěn)轉(zhuǎn)組大鼠腎小管上皮細胞有明顯克隆長出,建立PAX2基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染腎小管上皮細胞系。穩(wěn)轉(zhuǎn)組在熒光顯微鏡下可見綠色熒光,基因融合表達獲得成功。穩(wěn)轉(zhuǎn)組細胞PAX2條帶密度與β-action吸光度比值為(1.00±0.04),空載組為(0.83±0.03),對照組為(0.85±0.04),3組吸光度比值比較,差異有統(tǒng)計學意義(F=398.7,P0.05);其中穩(wěn)轉(zhuǎn)組吸光度比值高于空載組和對照組,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。細胞劃痕后18 h,對照組、空載組和穩(wěn)轉(zhuǎn)組細胞遷移率分別為(39.34±5.34)%、(40.56±7.54)%和(83.72±7.12)%,3組細胞遷移率比較,差異有統(tǒng)計學意義(F=431.8,P0.05);其中穩(wěn)轉(zhuǎn)組細胞遷移率高于對照組和空載組,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。各組細胞培養(yǎng)48 h后,對照組、空載組和穩(wěn)轉(zhuǎn)組遷移細胞分別為(23.33±3.63)、(22.00±8.14)、(45.67±7.14),3組遷移細胞數(shù)比較,差異有統(tǒng)計學意義(F=248.5,P0.05);其中穩(wěn)轉(zhuǎn)組遷移細胞數(shù)高于對照組和空載組,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論 p EGFP-PAX2質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)染大鼠腎小管上皮細胞,并成功篩選出高效穩(wěn)定表達PAX2的穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系。PAX2穩(wěn)轉(zhuǎn)增加了腎小管上皮細胞的遷移及侵襲能力。
【作者單位】： 遼寧醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院風濕免疫科;遼寧醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院耳鼻喉科;中國醫(yī)科大學附屬盛京醫(yī)院小兒腎臟風濕免疫科;
【關鍵詞】： PAX基因 細胞侵襲 細胞運動 腎小管 上皮細胞 大鼠
【基金】：遼寧省博士科研啟動基金計劃資助項目(20141136)
【分類號】：R692
【正文快照】： Study on the Construction of PAX2 Stably Transfected Cell Lines and Their Effects on Cell Migration and InvasionAbility LI Li,GONG Liang,WU Yu-bin.Department of Rheumatology and Immunology,the First Affiliated Hospital ofLiaoning Medical University,Jinzh

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本文編號：955053