本文關(guān)鍵詞：周期素依賴性蛋白激酶5過度活性與腎小球足細胞凋亡的關(guān)系研究

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【摘要】：目的通過在腎小球足細胞中轉(zhuǎn)染p25基因,探討周期素依賴性蛋白激酶5(Cdk5)的活性對足細胞結(jié)構(gòu)及功能的影響。方法 2014年度,于含10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液中培養(yǎng)分化成熟的小鼠離體足細胞,將足細胞分為對照組、空轉(zhuǎn)染組和p25轉(zhuǎn)染組。應(yīng)用p Ad Track-CMV病毒載體克隆p25基因,并轉(zhuǎn)染足細胞,48 h收集細胞;采用Western blotting法測定Cdk5、p25、p35及細胞凋亡相關(guān)蛋白Cleaved caspase3的表達水平;應(yīng)用免疫沉淀和同位素γ-32P標記法測定Cdk5活性;足細胞免疫熒光化學(xué)染色,觀察Cdk5、p35在足細胞中的表達,以及足細胞Actin的排列情況。結(jié)果 HEK293細胞Cdk5表達陽性,p35表達陰性,腎臟皮質(zhì)、足細胞和腎小球中均有不同程度的Cdk5和p35的表達。對照組和空轉(zhuǎn)染組p25表達陰性,p25轉(zhuǎn)染組p25表達陽性。各組細胞凋亡相關(guān)蛋白Cleaved caspase3表達水平和Cdk5活性比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);其中p25轉(zhuǎn)染組細胞凋亡相關(guān)蛋白Cleaved caspase3表達水平和Cdk5活性高于對照組和空轉(zhuǎn)染組(P0.05)。p25轉(zhuǎn)染組足細胞內(nèi)Actin排列紊亂,細胞形態(tài)發(fā)生異常改變,對照組和空轉(zhuǎn)染組細胞內(nèi)Actin排列正常,細胞形態(tài)沒有發(fā)生改變。結(jié)論 p25引起Cdk5過度活性可致腎小球足細胞形態(tài)改變,Actin排列紊亂,誘發(fā)細胞凋亡。因此,Cdk5的活性在維持足細胞正常結(jié)構(gòu)和功能方面發(fā)揮重要作用。
【作者單位】： 寧夏回族自治區(qū)人民醫(yī)院西北民族大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院腎內(nèi)科;寧夏醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 足細胞 細胞周期蛋白依賴激酶 p p 細胞凋亡
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(81160093,81460161) 寧夏自然科學(xué)基金資助項目(NZ14160) 寧夏科技支撐基金資助項目(2013ZYS103)
【分類號】：R692
【正文快照】： 周期素依賴性蛋白激酶5(Cdk5)與其激活蛋白Ch EMBL公司),Lipofectamin 2000基因轉(zhuǎn)染試劑、p35結(jié)合形成Cdk5/p35復(fù)合物,其活性與中樞神經(jīng)系DMEM培養(yǎng)液(美國Invitrogen生命技術(shù)公司),胎牛血統(tǒng)疾病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。在某些病理因素下,清(美國Hyclone公司)。p35被水解形成活

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本文編號：743301