本文關(guān)鍵詞：減少大鼠腎缺血再灌注損傷的方法對比研究

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【摘要】：目的:本研究將通過夾閉SD大鼠腎動脈制造腎臟缺血再灌注損傷(ischemia reperfusion injury,IRI)模型,在再灌注前后使用缺血后處理(ischemic postconditioning,IPost C)、遠程缺血預(yù)處理(remote ischemic preconditioning,RIPC)、肌苷注射液及HC-A腎保護液灌注處理等方法,缺血再灌注24小時、48小時、1周后檢測大鼠下腔靜脈血中尿素氮(BUN)及血清肌酐(Cr)的含量。通過組織病理學(xué)評價腎小管損傷程度,并檢測腎組織中髓過氧化物酶(Myeloperoxidase,MPO)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活性和丙二醛(Malondialdehyde,MDA)的活性以評估組織過氧化損傷的程度,綜合比較這幾種處理方法對腎IRI的保護作用。方法:選用成年健康雌性SD大鼠,體重約220±30g,隨機分假手術(shù)組(Sham組)、IR組、RIPC組、IPost C組、肌苷注射液處理組(肌苷組)和HC-A腎保護液灌注組(HC-A組)。各組SD大鼠開腹切除右側(cè)腎臟,夾閉左腎動脈45分鐘后恢復(fù)灌注,觀察腎動脈搏動及腎臟顏色變化,腎動脈恢復(fù)搏動,腎臟顏色由暗紅轉(zhuǎn)變紅潤,表示灌注成功。經(jīng)過上述處理干預(yù)后再灌注24小時、48小時及1周,分別抽取大鼠下腔靜脈血,用于檢測血清Cr和BUN評估腎功能。切除左腎,取部分腎組織用液氮低溫處理后轉(zhuǎn)入冰箱中-80℃下保存,用于檢測腎組織MDA、SOD及MPO酶活性。另部分腎組織放入4%多聚甲醛溶液中固定,用于蘇木精-伊紅(HE)染色制片。在光學(xué)顯微鏡下,按照Paller評分方法,每張玻片選5個不同的視野,每個視野隨機選擇10個腎小管,用評估腎小管上皮細胞損傷程度。數(shù)據(jù)分析應(yīng)用統(tǒng)計軟件SPSS 19.0,均數(shù)±標準差(sx±)表示,采用單因素方差分析比較組間差異,P0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:1、腎功能評價再灌注24小時和48小時后,IR組、Post C組、RIPC組、肌苷組、HC-A組與Sham組比較,血清中Cr顯著升高(p0.05);再灌注24小時后,Post C組、RIPC組、肌苷組及HC-A組與IR組比較,血清Cr顯著降低(p0.05);IPost C組和RIPC組與HC-A組比較,血清Cr降低(p0.05);再灌注48小時后,IPost C組、RIPC組、肌苷組與IR組及HC-A組比較,血清Cr降低(p0.05);1周后,IPost C組、RIPC組、肌苷組和HC-A組的血清Cr仍低于IR組(p0.05),與Sham組無明顯差異。再灌注24小時后IR組和HC-A組血清BUN與Sham組比較明顯升高(p0.05);Post C組、RIPC組、肌苷組及HC-A組與IR組比較,血清BUN降低(p0.05);Post C組和RIPC組較HC-A組血清BUN降低(p0.05)。再灌注48小時后,IR組和IPost C組血清BUN與Sham組比較升高(p0.05),IPost C組、RIPC組和肌苷組與IR組比較,血清BUN水平降低(p0.05)。2、腎組織病理觀察Sham組大鼠腎組織形態(tài)結(jié)構(gòu)未見明顯異常,IR組中再灌注24小時、48小時后腎組織結(jié)構(gòu)嚴重損傷,腎小管上皮細胞變性壞死,管腔擴張,內(nèi)可見大量壞死細胞;再灌注1周后腎組織中可見輕度局灶性炎癥和點狀壞死。IPost C組、RIPC組、肌苷組和HC-A組再灌注24小時和48小時后和IR組比較發(fā)現(xiàn)腎組織損傷減輕,腎小管上皮細胞水腫減輕,官腔輕中度擴張,腔內(nèi)可見少許炎性細胞聚集。再灌注1周后腎組織形態(tài)結(jié)構(gòu)基本恢復(fù),部分可見腎小管輕度水腫;3、腎組織MPO活性變化再灌注24小時后,IR組、IPost C組、RIPC組、HC-A組與Sham組比較,腎組織中MPO活性顯著升高(p0.05);再灌注48小時后,IR組、RIPC組、肌苷組和HC-A組與Sham組比較,腎組織中MPO活性升高(p0.05);灌注24小時和48小時后,IPost C組、RIPC組和肌苷組與IR組對比,腎組織MPO的活性顯著降低(p0.05);4、腎組織MDA活性變化再灌注24小時和48小時后,IR組、IPost C組、RIPC組、肌苷組、HC-A組與Sham組比較,腎組織中MDA活性顯著升高(p0.05);再灌注24小時后,IPost C組、RIPC組、肌苷組、HC-A組與IR組比較,腎組織中MDA活性顯著降低(p0.05);IPost C組和RIPC組與HC-A組對比,MDA活性降低(p0.05);再灌注48小時后,IPost C組、RIPC組和肌苷組與IR組比較,MDA活性降低(p0.05)。5、腎組織SOD活性變化再灌注24小時和48小時后,IR組、IPost C組、RIPC組、肌苷組、HC-A組與Sham組比較,腎組織中SOD活性明顯降低(p0.05);IPost C組、RIPC組、肌苷組和HC-A組腎組織中SOD活性與IR組對比則增高了(p0.05);再灌注1周后,HC-A組與Sham組比較,SOD活性降低(p0.05)。結(jié)論:IRI腎病理表現(xiàn)為腎組織細胞結(jié)構(gòu)和功能異常,Cr和BUN升高,MDA、MPO活性升高,SOD活性下降;實驗結(jié)果顯示,IPost C、HC-A腎保護液、RIPC及肌苷注射液處理等對IRI腎具有保護作用;其可通過降低MDA和MPO酶活性,提高SOD酶清除氧自由基能力等抗氧化機制,而達到保護腎功能作用。研究表明RIPC對IRI腎有保護作用,且和IPost C、肌苷注射液處理比較無明顯差異,較HC-A腎保護液處理對IRI腎更具有保護作用,因其操作簡易、無創(chuàng)傷、效果明確等優(yōu)點,因此具有更廣闊的臨床應(yīng)用前景。
【關(guān)鍵詞】：缺血后處理 遠程缺血預(yù)處理 肌苷注射液 腎保護液 缺血-再灌注損傷 抗氧化
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R692
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-14
• 第1章 前言14-17
• 第2章 實驗材料與儀器17-19
• 2.1 實驗動物17
• 2.2 主要試劑和儀器設(shè)備17-19
• 2.2.1 主要購置試劑17-18
• 2.2.2 主要儀器和設(shè)備18-19
• 第3章 實驗方法19-25
• 3.1 動物模型的制備和分組19-20
• 3.1.1 動物模型的制備19
• 3.1.2 動物分組19-20
• 3.2 觀測指標及方法20-24
• 3.2.1 標本采集20-21
• 3.2.2 腎組織固定及HE染色21
• 3.2.3 鏡下觀察和病理21-22
• 3.2.4 腎組織中髓過氧化物酶(MPO)活性的測定22-23
• 3.2.5 腎組織中丙二醛（MDA）含量的測定23-24
• 3.2.6 腎組織中超氧化物歧化酶（SOD）活性的測定24
• 3.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計學(xué)處理24-25
• 第4章 結(jié)果25-32
• 4.1 大鼠術(shù)后存活時間25
• 4.2 大鼠腎功能變化25-27
• 4.2.1 血清肌酐（Cr）的變化25-26
• 4.2.2 血清尿素氮（BUN）的變化26-27
• 4.3 腎組織病理學(xué)變化27-28
• 4.4 大鼠腎組織MPO活性的變化28-29
• 4.5 大鼠腎組織MDA含量的變化29-30
• 4.6 大鼠腎組織SOD活性的變化30-32
• 第5章 討論32-36
• 第6章 結(jié)論36-37
• 致謝37-38
• 參考文獻38-41
• 附圖41-44
• 綜述44-52
• 參考文獻50-52

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 余超;劉進;;雙下肢缺血預(yù)處理經(jīng)神經(jīng)通路對大鼠腦局部缺血再灌注損傷的保護作用[J];四川大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2014年02期

2 張郁林;黃燁;周波;楊衛(wèi)東;聶軍;李奎;萬沛;;蛋白激酶C在肺缺血預(yù)處理保護中的作用[J];東南大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2011年04期

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5 趙，

本文編號：733391