本文關鍵詞：沉默SET8的表達對腎細胞癌惡性表型的影響及其與Wnt信號通路相關性的機制研究

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【摘要】：目的研究通過沉默人腎細胞癌中組蛋白賴氨酸甲基化轉移酶SET8的表達,從而研究其對腎細胞癌惡性表型的影響,并且研究腎細胞癌中SET8與Wnt信號通路相關靶基因和靶蛋白的作用,探討其存在的臨床意義。方法1、沉默SET8的表達對腎癌細胞ACHN及786-0的增殖、凋亡、周期及侵襲轉移的影響：首先構建SET8基因敲除的慢病毒載體質粒pLKO.1/shSET8-1及pLKO.1/shSET8-2,將其分別轉染至腎癌細胞ACHN及786-0中,使腎癌細胞中SET8的表達下調。采用MTT法檢測其對細胞增殖的影響；采用流式細胞儀檢測其對細胞凋亡的影響：采用流式細胞儀檢測其對細胞周期的影響。采用Transwell體外侵襲轉移實驗檢測沉默SET8的表達對腎癌細胞侵襲轉移能力的影響。2、SET8與Wnt信號通路相關基因的作用：采用coimmunoprecipitation(co-IP)免疫共沉淀實驗檢測腎細胞癌中SET8與Wnt相關基因TCF4和LEF1相互作用關系。3、沉默SET8的表達對Wnt信號通路相關蛋白表達的影響：用Western blot法檢測沉默SET8后的腎癌細胞ACHN及786-0中Wnt信號通路的相關蛋白的表達情況。結果1、相比于對照組,ACHN和786-0兩種腎癌細胞在轉染了SET8基因敲除的病毒載體質粒pLKO.1/shSET8-1及pLKO.1/shSET8-2后,凋亡的細胞數(shù)目均沒有明顯差異(p0.05)；但是兩種細胞的增殖能力在沉默SET8后明顯下降(p0.01)；沉默SET8影響ACHN和786-0細胞周期,進入S期的細胞明顯增多(p0.01),沉默SET8后ACHN和786-0細胞的遷移及侵襲能力均明顯減弱(p0.01)。2、通過免疫共沉淀實驗提示SET8可以與TCF4、LEF1相互作用(p0.05)。3、Western blot實驗顯示沉默SET8的ACHN和786-0細胞中cyclin D1, LEF1, Surivrin and H4K20me-1的表達明顯下調(p0.01)。結論沉默SET8的表達可以影響腎細胞癌ACHN和786-0細胞的惡性表型,抑制腎腫瘤細胞的增殖,促進腫瘤細胞進入S期,使腎腫瘤細胞的侵襲轉移能力減弱。SET8可以與Wnt信號通路中的相關蛋白TCF4和LEF1作用,并且沉默SET8可以使Wnt信號通路相關蛋白的表達。
【關鍵詞】：SET8 腎細胞癌 Wnt信號通路 TCF4 LEF1
【學位授予單位】：南京大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.11
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 縮略詞表10-11
• 前言11-17
• 參考文獻13-17
• 材料與方法17-28
• 一、材料與試劑17-20
• 二、試驗方法20-27
• 三、統(tǒng)計學分析27-28
• 結果28-35
• 一、沉默SET8對腎細胞癌的增殖、凋亡、細胞周期及侵襲、轉移的影響28-33
• 二、SET8與Wnt信號通路相關基因的作用33-34
• 三、沉默SET8對Wnt信號通路相關蛋白表達的影響34-35
• 討論35-38
• 結論38-39
• 參考文獻39-41
• 綜述41-48
• 參考文獻44-48
• 致謝48-49

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

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本文編號：732963