膀胱癌T24耐藥株的構(gòu)建及其生物學(xué)特性分析
本文關(guān)鍵詞:膀胱癌T24耐藥株的構(gòu)建及其生物學(xué)特性分析
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【摘要】:背景:膀胱癌是泌尿生殖系統(tǒng)常見腫瘤之一,在西方發(fā)達(dá)國家中其發(fā)病率占男性惡性腫瘤的第4位,女性第9位。在我國居泌尿生殖系統(tǒng)惡性腫瘤發(fā)病第1位,,并且有逐年增長的趨勢。手術(shù)切除結(jié)合膀胱灌注治療是臨床上治療淺表性膀胱癌的主要手段,但仍有40%-80%的復(fù)發(fā)率;熌退幨菑(fù)發(fā)的主要原因之一,對于化療耐藥的機制目前并不明確。因此,我們通過構(gòu)建了膀胱移行細(xì)胞癌T24的耐藥株,并對其生物學(xué)特性進行分析,從而研究其形成機制。 實驗設(shè)計:采用絲裂霉素C(MMC)濃度梯度持續(xù)遞增法誘導(dǎo)建立膀胱癌T24耐藥株;使用高倍顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài);采用MTT法檢測耐藥株與親本細(xì)胞的增殖活性及生長能力;采用平板克隆形成試驗檢測耐藥株與親本T24細(xì)胞的單細(xì)胞集落形成能力;采用Transwell遷移、侵襲實驗檢測耐藥株與親本T24細(xì)胞的遷移和侵襲能力;采用無血清懸浮培養(yǎng)法檢測耐藥株與親本T24細(xì)胞的成球能力及腫瘤干細(xì)胞的富集情況。 結(jié)果:1.使用初始濃度為10μg/mL絲裂霉素持續(xù)增量誘導(dǎo),歷時4個月,直到細(xì)胞能在0.2mg/mL的RPMI1640培養(yǎng)基中穩(wěn)定、良好生長,并能持續(xù)傳代,形成膀胱癌T24耐藥細(xì)胞株。 2.在MTT試驗中,撤藥后T24/MMC的生長更加迅猛,生長能力較親代細(xì)胞增強。通過平板克隆試驗、Transwell遷移、侵襲實驗中發(fā)現(xiàn)T24/MMC細(xì)胞與親代細(xì)胞相比,克隆形成能力、遷移和侵襲能力均增加,說明耐藥株T24/MMC惡性程度更高。 3.在無血清成球培養(yǎng)試驗中,T24/MMC細(xì)胞在第三天就開始明顯成球,與親代細(xì)胞相比,成球時間更短,成球率更高,球囊更緊密,體積也更大,說明T24/MMC細(xì)胞中富集了癌干細(xì)胞。 結(jié)論:低濃度絲裂霉素持續(xù)增量法可誘導(dǎo)形成膀胱癌T24耐藥細(xì)胞株,且耐藥株T24/MMC惡性程度更高,癌干細(xì)胞被富集。
【關(guān)鍵詞】:膀胱癌 T24 耐藥株 癌干細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】:湖北科技學(xué)院
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2015
【分類號】:R737.14
【目錄】:
- 英文縮略詞表4-5
- 摘要5-6
- Abstract6-8
- 前言8-10
- 材料與方法10-16
- 結(jié)果16-20
- 討論20-27
- 參考文獻(xiàn)27-33
- 文獻(xiàn)綜述33-42
- 參考文獻(xiàn)39-42
- 攻讀學(xué)位期間取得的學(xué)術(shù)成果42-43
- 致謝43
【參考文獻(xiàn)】
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本文編號:711604
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