本文關(guān)鍵詞：基質(zhì)-Gla蛋白對(duì)草酸鈣晶體滯留的作用及機(jī)制研究

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【摘要】：目的：采用單一乙二醇誘導(dǎo)SD大鼠建立草酸鈣晶體動(dòng)物模型；華法林失活MGP類蛋白,探討MGP類蛋白對(duì)大鼠草酸鈣晶體滯留的影響及機(jī)制。方法： SD雄性大鼠50只分為對(duì)照組：空白對(duì)照組(TC組,n=11)、華法林對(duì)照組(WC組,n=12)及實(shí)驗(yàn)組：乙二醇造模組(GM組,n=12)、華法林乙二醇組(WGM組,n=15)。本實(shí)驗(yàn)采用0.75%乙二醇飲水誘導(dǎo)SD雄性大鼠形成草酸鈣晶體動(dòng)物模型；華法林腹腔注射干預(yù)MGP類蛋白羧化使其失活,第5天收集、分析24h尿液,第7天處死大鼠,收集血樣并檢測(cè)血鈣、磷、肌酐、尿酸等生化指標(biāo)；采用顯微CT觀察鈣化及晶體分布特點(diǎn)；分別采用蘇木精-伊紅(HE)染色及Von-Kossa's染色鈣鹽染色,并使用偏光顯微鏡觀察,人工分析計(jì)數(shù)；免疫組織化學(xué)觀察草酸鈣晶體腎組織MGP蛋白的定位與表達(dá)。結(jié)果：1、實(shí)驗(yàn)大鼠情況：實(shí)驗(yàn)過程大鼠死亡3只；體重增幅：WGM組、WC組較TC組顯著性下降；2、血清生化檢測(cè)：在尿素上：GM組、WC及WGM組相比TC顯著下降,并存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。血鈣上：WC、WGM組明顯低于TC、GM組并有顯著差異性,余組相比無差異性。血磷、鎂上各組比較未見顯著差異性。3、24h尿生化：給藥組24h尿肌酐略高于對(duì)照組；實(shí)驗(yàn)組24h尿Ca2+、UA、P明顯低于對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)組尿草酸明顯高于對(duì)照組,對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組組間比較未見明顯差異；WGM組尿Ca2+、UA、P、Ox相比TC組存在顯著性差異；WGM組在Ca2+、UA、Ox上相比WC組有顯著性差異；GM組在UA、P相比對(duì)照組存在顯著差異；GM組在UA、P相比對(duì)照組存在顯著差異,Ca2+、P上相比WC組存在顯著差異性；各組尿鎂未見明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。尿枸櫞酸上,TC組、GM組明顯高于WC組、WGM組,WGM組相比GM組、TC組存在顯著差異性,WC組相比TC組存在顯著差異性,WGM組較WC組無明顯差異性,GM組相比TC組無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異性。4、腎乳頭鈣化的顯微CT結(jié)果：TC組、WC組未見明顯鈣化陰影,實(shí)驗(yàn)組觀察到有鈣化陰影,且WGM組較GM組出現(xiàn)鈣斑大鼠比例高,存在顯著差異,且鈣斑更明顯,廣泛。5、病理染色及晶體計(jì)數(shù)比較：兩種染色對(duì)照組均未見鈣鹽染色,實(shí)驗(yàn)組在HE染色及Von-Kossa's染色中均發(fā)現(xiàn)腎小管內(nèi)草酸鈣晶體存在,腎小管腔擴(kuò)張；人工統(tǒng)計(jì)每切片上晶體數(shù)目,WGM組晶體滯留數(shù)目明顯高于GM組,且計(jì)數(shù)存在顯著差異。6、免疫組化：TC組及WGM醇組在腎皮質(zhì)和髓質(zhì)腎小管上皮細(xì)胞存在廣泛染色。結(jié)論：1.實(shí)驗(yàn)7天內(nèi)成功在SD雄性大鼠體內(nèi)誘導(dǎo)腎小管內(nèi)草酸鈣晶體形成及高草酸尿癥、低枸櫞酸尿癥。2.MGP類蛋白失活對(duì)SD大鼠腎小管內(nèi)草酸鈣晶體形成及滯留具有明顯促進(jìn)作用。3.免疫組化見MGP在腎皮質(zhì)及腎髓質(zhì)廣泛表達(dá),正常組及草酸鈣結(jié)晶組未見明顯變化。
【關(guān)鍵詞】：草酸鈣結(jié)石 動(dòng)物模型 華法林 晶體滯留 MGP(Macrix-Gla protein)
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R691.4
【目錄】：

• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 中英文縮略詞表11-12
• 前言12-15
• 1. 泌尿系結(jié)石機(jī)制的研究意義12
• 2. MGP對(duì)尿石滯留特點(diǎn)的探討12-15
• 第一部分 理論研究15-23
• 1.1 中醫(yī)對(duì)尿石癥的認(rèn)識(shí)15-17
• 1.1.1 尿石的病因病機(jī)研究15
• 1.1.2 尿石癥的辨證論治15-16
• 1.1.3 現(xiàn)代關(guān)于抗凝與中藥活血化瘀的研究16-17
• 1.2 草酸鈣結(jié)石的現(xiàn)代研究17-21
• 1.2.1 草酸鈣結(jié)石模型的建立與探討17-18
• 1.2.2 草酸鈣結(jié)石的代謝研究18-19
• 1.2.3 草酸鈣結(jié)石的形成機(jī)制研究19-21
• 1.3 腎鈣素、尿凝血酶片段1類含Gla蛋白對(duì)尿石形成機(jī)制的探討21-23
• 第二部分 實(shí)驗(yàn)研究23-34
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料23-24
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物23
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器和器材23
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)制劑的制備23-24
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法24-27
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組24
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物24尿液采集24-25
• 2.2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血清采集25
• 2.2.4 采集腎臟及腎乳頭標(biāo)本及顯微CT觀察25
• 2.2.5 腎組織病理學(xué)檢查及偏光顯微鏡檢查25-26
• 2.2.6 MGP的免疫組化表達(dá)26-27
• 2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法27
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果27-33
• 2.4.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物死亡情況27
• 2.4.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重增長(zhǎng)情況27-28
• 2.4.3 各組大鼠血清生化分析結(jié)果28
• 2.4.4 各組大鼠24h尿BUN,Cr,UA,IP,Ca2+,Ox及CA分析28-30
• 2.4.5 腎乳頭的顯微CT觀察30-31
• 2.4.6 腎組織病理及偏光顯微鏡檢查31-33
• 2.4.7 MGP的免疫組化表達(dá)33
• 2.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)論33-34
• 第三部分 討論34-36
• 參考文獻(xiàn)36-40
• 攻讀碩士學(xué)位期間取得的學(xué)術(shù)成果40-41
• 致謝41

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：692619