發(fā)布時間：2017-08-12 17:26

  本文關(guān)鍵詞：小鼠足細胞特異敲除核因子-κB受體活化因子對蛋白尿的影響

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【摘要】：研究背景隨著社會經(jīng)濟發(fā)展,人民生活水平的提高,慢性腎臟病(CKD)已成為威脅人類健康的全球性公共健康問題。有調(diào)查表明,在我國,成年人中CKD患病率高達10.8%。而慢性腎臟病的特點是隱匿起病,逐漸進展,不可逆轉(zhuǎn)。近幾年來,我國每年進入腎臟病終末期的患者人數(shù)依舊不斷攀升,因此,如何延緩CKD的進展成為急需解決的一項醫(yī)療難題。大量研究表明,蛋白尿是影響CKD惡化的獨立危險因素之一,蛋白尿的水平將直接影響慢性腎臟疾病的預(yù)后,故如何降低蛋白尿水平具有重大的醫(yī)學(xué)研究價值。腎小球濾過屏障的功能和結(jié)構(gòu)與蛋白尿的發(fā)生發(fā)展存在相關(guān)聯(lián)系。腎小球濾過屏障由5層結(jié)構(gòu)組成：內(nèi)皮細胞表面膜結(jié)構(gòu),內(nèi)皮細胞及內(nèi)皮細胞窗孔,腎小球基底膜(GBM),足細胞下間隙和足細胞。足細胞足突之間的裂孔膜構(gòu)成了腎小球濾過的最后一道屏障。隨著認(rèn)識的進一步加深,越來越多的文獻指出,足細胞在參與蛋白尿的發(fā)生中占據(jù)了重要的地位。足細胞是位于腎小球臟層的上皮細胞。相鄰足細胞足突之間呈指狀交叉形成濾過的裂孔。裂隙間由裂孔隔膜構(gòu)成,足突之間的裂孔膜構(gòu)成了腎小球濾過的最后一道屏障。只有小分子物質(zhì)能夠通過裂孔隔膜,而蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)不能通過。足細胞頂膜區(qū)覆蓋著帶有負電荷的podocalyxin,它參與了維持腎小球濾過膜負電荷屏障。而足細胞特殊結(jié)構(gòu)的維持有賴于微絲肌動蛋白為主的細胞骨架結(jié)構(gòu)以及足細胞中特異性表達的蛋白分子,包括以nephrin為代表的SD膜蛋白；以α3β1整合素為代表的基底膜-足細胞連接到膜蛋白；以及以podocalyxin為代表的足細胞頂端蛋白。足細胞的受損會破壞正常的腎小球濾過屏障,導(dǎo)致蛋白尿的發(fā)生。在人類疾病中,微小病變型腎病、膜性腎病及局灶節(jié)段性腎小球腎病等已被證實與足細胞的損傷存在聯(lián)系。而足細胞是有絲分裂期后的細胞,高度分化,分裂增殖能力有限,故損傷丟失后難以再生。足細胞損傷后,周邊的足細胞會肥大以覆蓋住裸露的毛細血管叢,同時,肥大的足細胞的易損性會增加。當(dāng)肥大的足細胞失代償后,不足以覆蓋住裸露的毛細血管叢時,失去足細胞支撐的基底膜就會凸向腎小囊,進而與腎小球壁層細胞粘連,最終導(dǎo)致會腎小球硬化的發(fā)生。足細胞損傷后會發(fā)生形態(tài)學(xué)及非形態(tài)學(xué)的改變,形態(tài)學(xué)的改變?nèi)缱阃蝗诤?細胞肥大及凋亡等；而非形態(tài)學(xué)的改變?nèi)缱慵毎禺惖鞍追肿?synaptopodin等)及足細胞骨架的改變等。例如LPS就是通過影響肌動纖維的重組從而引起足突動力系統(tǒng)改變,在體外實驗表現(xiàn)為遷移能力及侵襲能力的增強,即活動力增強,而在體內(nèi)實驗中就表現(xiàn)為足細胞足突的融合,進而導(dǎo)致蛋白尿的發(fā)生。在人類腎小球疾病及LPS誘導(dǎo)的小鼠短暫蛋白尿模型中可以觀察到足細胞尿激酶受體(urokinase receptor,uPAR)表達增加。uPAR是糖基化磷脂酰肌醇錨定蛋白中的一種,主要在炎癥細胞中表達,它通過與細胞表面的整合素結(jié)合,形成信號傳導(dǎo)復(fù)合體,在炎癥細胞的遷徙中起重要作用。在足細胞損傷的過程中,為了適應(yīng)環(huán)境,足細胞會產(chǎn)生一些異常蛋白以避免損傷的惡化,及存在細胞骨架蛋白的丟失,這種丟失以肌動蛋白為主。同時,也存在一些足細胞特異性表達蛋白的缺失,例如WT1及Synaptopodin等。在足細胞胞漿區(qū)α3β1整合素通過肌動蛋白相關(guān)蛋白復(fù)合物(包括talin,vinculin等)與骨架蛋白肌動蛋白相互作用,從而維持濾過膜結(jié)構(gòu)正常,且其對于GBM的黏附極其重要。α3β1整合素通過下調(diào)Bax/Bcl2/PKC通路阻止足細胞凋亡脫落。整合素是粘附分子的一種,它們存在于細胞表面,化學(xué)成分是糖蛋白,可以指導(dǎo)細胞合成細胞外基質(zhì),維持組織的正常結(jié)構(gòu)和功能,介導(dǎo)細胞與細胞外基質(zhì)的黏附及信息傳遞。而在腎臟組織中,以p1類整合素最為多見[1]。整合素的p鏈負責(zé)與下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子相互作用[2]。α3β1作為足細胞最主要表達的整合素,主要沿著GBM分布,同時,將足細胞錨定于GBM上,從而維持腎小球的正常濾過功能。以往存在實驗證實,利用特異抗體阻斷β1結(jié)合域,可以引起足突消失及蛋白尿的發(fā)生。而進一步的研究表明,α3β1整合素通過下調(diào)Bax/Bcl-2、蛋白激酶C(PKC)通路阻止足細胞凋亡和脫落[3]。以上結(jié)果均提示β1整合素在足細胞生長、發(fā)育及損傷中存在重要的作用。相對于β1整合素而言,β3整合素在腎臟表達的較少。但是近年來的研究發(fā)現(xiàn), uPAR-β3整合素系統(tǒng)在蛋白尿的發(fā)生和局灶性節(jié)段性腎小球硬化疾病的發(fā)生中存在重要的作用。uPAR是一種與細胞活動性相關(guān)的分子,主要表達在活動性強的細胞上。p3整合素與uPAR結(jié)合為脂質(zhì)依賴的復(fù)合物,共同地表達于足細胞上。因而,β3整合素結(jié)構(gòu)的改變會該復(fù)合物的活化,進而導(dǎo)致與配體之間的吸引力增加。在小鼠體內(nèi),活化的β3整合素會導(dǎo)致蛋白尿的發(fā)生。相反,阻斷uPAR的表達及β3整合素的活化會減少足細胞足突的融合及蛋白尿的發(fā)生[4]。已有研究表明,NFAT-鈣調(diào)磷酸酶途徑參與活化足細胞中uPAR的轉(zhuǎn)錄,從而導(dǎo)致β3整合素的活化和蛋白尿的發(fā)生。運用環(huán)孢素或NFAT抑制劑11R-VIVIT可阻斷該途徑且減少uPAR的表達。并且,鈣調(diào)磷酸酶-]NFAT途徑存在于uPAR的上游[5-6]。NF-κB配體的受體活化因子(RANKL)及RANK共同組成了TNF受體超家族成員信號傳導(dǎo)路徑。RANKL是破骨細胞分化、發(fā)育、成熟過程中起關(guān)鍵作用的細胞因子[7]。在破骨細胞中,RANKL通過與RANK結(jié)合,再募集TNF受體相關(guān)因子,激活核轉(zhuǎn)錄因子κB (NF-κB)或分裂原激活的蛋白激酶(MAPKs),從而調(diào)節(jié)破骨細胞的生存、分化、凋亡與活化。而骨保護素(OPG)是這一旁路的誘騙(decoy)受體,它通過與RANK結(jié)合從而阻斷這一信號途徑。對該系統(tǒng)的研究,以往的研究主要集中在骨質(zhì)疏松及骨腫瘤性疾病中。但近年來的研究發(fā)現(xiàn),該系統(tǒng)不僅在腎性骨病,前列腺癌及乳腺癌等疾病的發(fā)病中起重要作用[8-9],且參與自身免疫系統(tǒng)疾病的發(fā)生發(fā)展。近年來的研究中發(fā)現(xiàn),該系統(tǒng)也與足細胞的損傷存在一定聯(lián)系。在我們以往的研究中發(fā)現(xiàn),正常足細胞上RANK表達低水平,但在足細胞疾病中,RANK表達水平明顯升高；在動物模型中,嘌呤霉素氨基核苷可誘導(dǎo)大鼠足細胞產(chǎn)生RANK,且誘導(dǎo)足細胞凋亡,在5/6腎切除動物模型中,RANK也是高表達的,且纈沙坦可減少其水平；以上實驗結(jié)果均說明RANK可能是導(dǎo)致足細胞損傷的有害因子[14-15]。因此,為進一步探討足細胞損傷的原因,本實驗利用Cre-LoxP重組酶系統(tǒng)得到足細胞特異性RANK敲除鼠,觀察在足細胞中特異敲除RANK基因?qū)ψ慵毎斐傻挠绊?進而制作LPS誘導(dǎo)的小鼠短暫性蛋白尿模型,通過觀察KO組小鼠與其同窩對照組小鼠(W組)及普通C57小鼠(C57組),探討RANK參與足細胞損傷具體機制及可能的相關(guān)分子, 為治療腎小球疾病尋找關(guān)鍵的調(diào)控靶點。研究目的RANK在足細胞損傷中的意義。損傷足細胞中RANK的信號途徑。研究方法一、足細胞特異RANK基因敲除小鼠鑒定及表型觀察。(一)、RABK：小鼠的培育及鑒定B6.Cg-Tg(NPHS2-cre)295Lbh/J小鼠購自美國Jackson實驗室,RANK-loxP鼠由澳大利亞University of Western Australia的鄭銘豪教授提供,在南京大學(xué)-南京生物醫(yī)藥研究院飼養(yǎng)及繁殖。飼養(yǎng)與中山大學(xué)北校區(qū)動物實驗中心的無特定病原菌(SPF)環(huán)境中,12小時光照／黑暗交替,自由進食、飲水。留小鼠尾巴提取DNA后進行基因型鑒定。普通C57小鼠購于中山大學(xué)東校區(qū)動物實驗中心,飼養(yǎng)于中山大學(xué)北校區(qū)動物實驗中心的無特定病原菌(SPF)環(huán)境中,12小時光照／黑暗交替,自由進食、飲水。選擇不同基因型的雌性小鼠各6只,年齡為6-8周,體重為20-30g,進行表型觀察,內(nèi)容包括：體重和腎臟形態(tài)。二、建立脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的小鼠短暫蛋白尿模型,觀察三組小鼠腎臟組織病理,足突融合及對Integrin-β1、integrin-β3、uPAR表達的影響。(一)、動物分組及脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的小鼠短暫蛋白尿模型的建立隨機選取年齡為6-8周的雌性小鼠經(jīng)基因鑒定為RANK足細胞特異敲除鼠(RANK-/-),野生型對照組(WT)小鼠及普通C57小鼠各6只,體重為20-30g。分為C57組(普通C57小鼠),W組(野生型對照組小鼠)及KO組(足細胞特異性RANK-/-小鼠)。在LPS前分別收集18只小鼠的24h尿液,檢測尿量及白蛋白肌酐比。之后給予100μg/只腹腔注射LPS,于24h后收集24h尿液測量尿量及白蛋白肌酐比。所有小鼠飼養(yǎng)于代謝籠中,自由進食和飲水。(二)、標(biāo)本取材及處理分別在給藥前及給藥后第二天收集24h尿液,分別處死三組動物。留取腎皮質(zhì),一部分于液氮罐中長期保存,另一部分用于病理檢查并制作冰凍切片用于后期免疫熒光實驗,電鏡檢查以及提取蛋白做westernblot實驗。(三)、各指標(biāo)的檢測與觀察1、LPS造模后尿白蛋白肌酐比測定：小鼠腹腔注射LPS后收集24h尿液。按照試劑盒要求,用ELISA法測定尿液中白蛋白及肌酐的含量,計算尿白蛋白肌酐比值。2、病理：LPS前后三組小鼠均取腎組織制成石蠟切片行PAS染色,觀察LPS前后三組腎小球和腎小管損傷程度。WT 1可作為足細胞胞核的特異性標(biāo)記用來計數(shù)足細胞。免疫組化：兔抗大鼠WT1(SC-192)購自美國Santa Cruz公司,SP法按試劑盒說明書操作。實驗結(jié)果應(yīng)用病理圖像分析軟件做半定量分析,每個切片隨機選取10個腎小球(400倍),對于WT1染色的切片,在電腦保存400倍圖像的同時,計數(shù)染色陽性的足細胞個數(shù)。3、電鏡：小鼠腹腔注射LPS后收集完24h尿液,第二天處死。取新鮮腎臟皮質(zhì)標(biāo)本1-2mm3,立即送冰凍切片。美國FEI透射電鏡(Tecnai G2 Spirit Twin):觀察腎小球基底膜厚度,足細胞形態(tài)。每只小鼠選擇1-2個腎小球,對每個腎小球隨機選取10-20個不同位置進行測定。4、免疫熒光及激光共聚焦：1).臨用前拿出切片,室溫充分晾干,切忌干片；2).用1xPBS洗3次×5分鐘／每次；3).吸取0.5%TritonX-100置于組織上,透化20分鐘;4).用1 xPBS洗3次×5分鐘／每次；5).滴加5%BSA置于室溫下封閉10分鐘；6).加一抗在濕盒里,4℃過夜；7).1×PBS洗3次,每次5分鐘；8).再于組織上滴加第二種一抗(須與第一種一抗種屬不同)；9).滴加熒光二抗(用I%BSA稀釋)置于室溫37℃,反應(yīng)60分鐘,注意避光；10),.用1xPBS洗3次×5分鐘／每次；11).如需做雙重免疫熒光,再滴加第二種二抗于37℃,反應(yīng)60分鐘；12).用1xPBS洗3次×5分鐘/每次；13).抗熒光衰減劑封片；14).濕盒避光放入4℃冰箱待觀察；15).共聚焦顯微鏡觀察。5、Westernblot:小鼠腹腔注射LPS后收集完24h尿液,第二天處死。取新鮮腎臟切取黃豆粒大小用錫箔紙包住放入液氮中,迅速取出后用研缽研磨至糊狀,放入細胞裂解液中,再用細胞超聲粉碎機粉碎；冰上靜置10min。 14000rpm,5min離心,取上清至新EP管,而后8000rpm, 10min離心,取上清為相應(yīng)標(biāo)本的蛋白。用BSA試劑盒測量每個標(biāo)本的蛋白濃度,計算配平后將蛋白變性。蛋白電泳使用7.5%SDS-聚丙烯酰胺凝膠,轉(zhuǎn)膜使用PVDF膜,轉(zhuǎn)膜后使用5%脫脂牛奶室溫封閉1h,而后將膜放入特異性抗體中4℃過夜。第二天用PBS-0.1%Tween20洗膜,之后與相應(yīng)的二抗結(jié)合室溫孵育1h; PBS-0.1%Tween20洗膜3次,每次10min,暗房曝光。三、統(tǒng)計學(xué)處理本研究所有實驗均重復(fù)3次,結(jié)果以x±s表示。本實驗所有的數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行處理,組間比較采用單因素方差分析,Levene檢驗方差齊性為方差齊,P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果一、足細胞特異RANK基因敲除小鼠的體質(zhì)量,腎臟形態(tài)、重量與野生型對照組(WT)小鼠及普通C57小鼠差異無統(tǒng)計學(xué)意義。將RANK-loxP鼠與NPHS2啟動Cre的轉(zhuǎn)基因鼠B6.Cg-Tg(NPHS2-cre)295Lbh/J交配,篩選出同時含有Cre及RANK兩種基因型的子代小鼠,其足細胞將缺失RANK基因表達。在小鼠成年期(6-8周時),對6只雌性的RANK-/-小鼠與WT小鼠及普通C57小鼠進行比較。C57組小鼠體重(25.47±6.03)vs W組小鼠體重(22.45±2.38) vs KO組小鼠體重(23.72±.41)差異無統(tǒng)計學(xué)意義。C57組小鼠腎臟重量(1.27±0.05)vs W組小鼠腎臟重量(1.12±0.11) vs KO組小鼠腎臟重量(1.15±0.10)差異無統(tǒng)計學(xué)意義。二、注射脂多糖(LPS)后,足細胞特異RANK基因敲除小鼠(KO組)蛋白尿較野生型對照組(WT)小鼠及普通C57小鼠有所減少。實驗前,三組小鼠尿白蛋白肌酐比分別為C57組(6.34±0.68)vs W組(7.39±1.84) vs KO組(7.40±1.60),差異無統(tǒng)計學(xué)意義。注射LPS后24h,三組小鼠尿白蛋白肌酐比(μg/mg)開始顯著升高,提示造模成功。同時KO組(23.70±9.90)明顯低于野生型對照組(107.56±22.32)及普通C57小鼠組(132.13±14.26),(P0.05)。三、注射脂多糖(LPS)后,三組小鼠腎臟組織病理結(jié)果無明顯改變,三組小鼠足細胞數(shù)目均有所下降,但KO組足細胞數(shù)目較其余兩對照組下降得更少。(一)、三組小鼠腎臟組織病理結(jié)果實驗前,各組小鼠腎臟組織在PAS染色下觀察形態(tài)正常,腎小球和腎小管均無病變。注射LPS后,三組小鼠的腎小球和腎小管病理改變無明顯差別。(二)、足細胞計數(shù)結(jié)果LPS前,三組小鼠足細胞數(shù)目差別無統(tǒng)計學(xué)意義。LPS后,三組小鼠足細胞數(shù)目都有所下降,但C57組及W組的足細胞數(shù)目明顯比KO組低,且差別有統(tǒng)計學(xué)意義,提示LPS后C57組及W組足細胞丟失得更多；LPS后KO組足細胞也存在丟失,但較對照組少。四、電鏡下足細胞特異RANK基因敲除小鼠的足細胞足突融合較野生型對照組(WT)小鼠及普通C57小鼠有所減少。實驗前,各組小鼠腎臟組織在電鏡下觀察形態(tài)正常,足細胞無病變。注射LPS后24h,可以觀察到三組小鼠足細胞足突出現(xiàn)融合。但在C57組及W組,足細胞足突融合范圍更廣泛,而KO組足細胞足突融合情況明顯較對照組減輕。五、脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的小鼠短暫蛋白尿模型中,三組小鼠腎臟組織中Integrin-β1、integrin-β3、uPAR表達的影響。(一)、使用激光共聚焦顯微鏡觀察雙重免疫熒光染色的小鼠腎臟組織Synaptopodin(綠色熒光)是足細胞特異性骨架蛋白,可以用來定位足細胞。在注射LPS前,三組小鼠Synaptopodin表達無差異。已知在正常小鼠腎小球上,RANK (紅色熒光)是微量表達于足細胞的。在本實驗結(jié)果中,注射LPS前,C57組及W組RANK均微量表達,但KO組無RANK表達。在注射LPS后,三組小鼠Synaptopodin表達均有所下降,且C57組及W組RANK表達量明顯上升,但KO組依舊無RANK表達。提示KO組的確為足細胞特異性RANK敲除鼠。脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的小鼠短暫蛋白尿模型中,三組小鼠腎臟組織中integrin-β1表達的影響。在本實驗結(jié)果中,注射LPS前三組小鼠integrin-β1(紅色熒光)在腎小球上表達無明顯差異,與Synaptopodin(綠色熒光)共定位。而注射LPS后,三組小鼠integrin-β1的表達均有所下降,但KO組小鼠相對其他兩組小鼠integrin-β1表達的下降有所增加。2、脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的小鼠短暫蛋白尿模型中,三組小鼠腎臟組織中integrin-β3表達的影響。在本實驗結(jié)果中,注射LPS前三組小鼠integrin-β3(紅色熒光)在腎小球上表達無明顯差異,與Synaptopodin(綠色熒光)共定位。而注射LPS后,三組小鼠integrin-β3的表達均有所升高,但KO組小鼠相對其他兩組小鼠integrin-β3表達的升高有所減少。(二)、使用Westernblot檢測三組小鼠腎臟組織中integrin-β1、integrin-β3、 uPAR表達的影響。1、脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的小鼠短暫蛋白尿模型中,三組小鼠腎臟組織中integrin-β1表達的影響。Western方法檢測發(fā)現(xiàn)LPS后三組小鼠腎臟組織的Integrin-β1表達均有所下降,但KO組相對于C57組及W組,Integrin-β1的表達下降的更多。脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的小鼠短暫蛋白尿模型中,三組小鼠腎臟組織中integrin-β3表達的影響。Western方法檢測發(fā)現(xiàn)LPS后三組小鼠腎臟組織的Integrin-β3表達均有所上升,但KO組相對于C57組及W組,Integrin-β3的表達上升的更少。3、脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的小鼠短暫蛋白尿模型中,三組小鼠腎臟組織中uPAR表達的影響。Western方法檢測發(fā)現(xiàn)LPS后三組小鼠腎臟組織的、uPAR表達均有所上升,但KO組相對于C57組及W組,uPAR的表達上升的更少。結(jié)論一、足細胞特異RANK基因敲除小鼠的體質(zhì)量,腎臟形態(tài)、重量及蛋白尿水平與野生型對照組(WT)小鼠及普通C57小鼠差異無統(tǒng)計學(xué)意義。二、在脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的小鼠短暫蛋白尿模型中,足細胞特異RANK基因敲除小鼠的蛋白尿水平較其余兩對照組有明顯減少,提示RANK在足細胞損傷中具有重要價值。三、在脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的小鼠短暫蛋白尿模型中,三組小鼠腎臟組織病理結(jié)果無明顯改變,三組小鼠足細胞數(shù)目均有所下降,但KO組足細胞數(shù)目較其余兩對照組下降得更少,且電鏡下KO組足突融合較其余兩對照組有所減少,提示足細胞特異性敲除RANK基因?qū)ψ慵毎哂斜Ｗo意義。四、在脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的小鼠短暫蛋白尿模型中,KO組小鼠的integrin-β1表達較其余兩對照組小鼠下降的更多,integrin-β3表達較其余兩對照組小鼠上升的更少,uPAR的表達較其余兩對照組小鼠上升的更少,提示在足細胞中RANK基因可能通過與integrin-β1,uPAR及integrin-β3等分子相互作用,從而介導(dǎo)足細胞的損傷,影響蛋白尿的發(fā)生。
【關(guān)鍵詞】：RANK LPS 足細胞 基因敲除
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R692
【目錄】：

• 摘要3-13
• ABSTRACT13-22
• 引言22-26
• 材料與方法26-45
• 1. 實驗材料26
• 2. 主要試劑26
• 3. 主要儀器26-27
• 4. 足細胞特異RANK基因敲除鼠的培育及鑒定27-30
• 5. 脂多糖誘導(dǎo)的短暫蛋白尿小鼠動物模型的建立30-31
• 6. 尿蛋白的測定31-34
• 7. 腎臟病理分析及足細胞計數(shù)34-37
• 8. 電鏡下足細胞足突融合的觀察37-38
• 9. 免疫熒光及激光共聚焦38-40
• 10. 蛋白免疫印跡40-44
• 11. 統(tǒng)計學(xué)處理44-45
• 結(jié)果45-55
• 一、足細胞特異RANK基因敲除小鼠的體質(zhì)量,腎臟形態(tài)、重量與野生型對照組(WT)小鼠及普通C57小鼠差異無統(tǒng)計學(xué)意義45-47
• 二、注射脂多糖(LPS)后,足細胞特異RANK基因敲除小鼠(KO組)蛋白尿較野生型對照組(WT)小鼠及普通C57小鼠有所減少47-48
• 三、注射脂多糖(LPS)后,三組小鼠腎臟組織病理結(jié)果無明顯改變,三組小鼠足細胞數(shù)目均有所下降,但KO組足細胞數(shù)目較其余兩對照組下降得更少48-50
• 四、電鏡下足細胞特異RANK基因敲除小鼠的足細胞足突融合較野生型對照組(WT)小鼠及普通C57小鼠有所減少50-51
• 五、脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的小鼠短暫蛋白尿模型中,三組小鼠腎臟組織中RANK、Integrin-β1、integrin-β3表達的影響51-55
• 討論55-61
• 結(jié)論61-63
• 參考文獻63-66
• 中英文詞表66-67
• 在讀碩士期間的成果67-68
• 致謝68-69

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6 康林;楊巧芳;沈敬華;;足細胞在腎小球疾病中的認(rèn)識進展[J];中國醫(yī)藥科學(xué);2013年23期

7 趙向婭;馮曉蓓;王朝暉;王偉銘;潘曉霞;李曉;任紅;陳楠;;尿足細胞及其相關(guān)分子在腎小球疾病中的表達[J];中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志;2009年06期

8 戴厚永;湯日寧;鄭敏;倪杰;馬坤嶺;劉必成;;結(jié)締組織生長因子在高糖誘導(dǎo)的足細胞上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化中的作用[J];中國病理生理雜志;2011年12期

9 鄭春霞;劉志紅;;足細胞與機體免疫系統(tǒng)[J];腎臟病與透析腎移植雜志;2012年04期

10 張迎華;朱曉玲;湯絢麗;;尿液足細胞檢測及其臨床意義的探討[J];中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志;2014年03期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 孫紹軍;;足細胞表達的蛋白分子與腎小球損傷[A];第五次全國中青年檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

2 曹璐;毛建華;姚盛華;王文靜;王大燕;;Cullin-5表達下調(diào)對足細胞形態(tài)及增值功能的初步影響[A];2011年浙江省醫(yī)學(xué)會兒科學(xué)分會學(xué)術(shù)年會暨兒內(nèi)科疾病診治新進展國家級學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2011年

3 趙敬;王穎超;趙宗江;楊美娟;;糖腎平對高糖+LPS刺激足細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)分化的影響[A];第十一次中國中西醫(yī)結(jié)合實驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2013年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 孫煜;神經(jīng)標(biāo)志蛋白在足細胞中的表達及其調(diào)節(jié)作用[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

2 李艷嬌;過氧化物酶體增殖物激活受體γ激動劑對大鼠足細胞Ⅳ型膠原表達的抑制及作用機制研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

3 宋志霞;活性維生素D3對糖尿病腎病大鼠足細胞的保護作用及其機制研究[D];東南大學(xué);2015年

4 方展;醛固酮對足細胞的損傷機制[D];華中科技大學(xué);2009年

5 孫希鋒;TRPC6在足細胞損傷中的作用研究[D];華中科技大學(xué);2009年

6 姜華軍;CD2AP在足細胞中的生理功能研究[D];華中科技大學(xué);2008年

7 李明珍;線粒體氧化應(yīng)激與實驗性糖尿病腎病足細胞的損傷[D];天津醫(yī)科大學(xué);2008年

8 劉海梅;地塞米松改善足細胞細胞骨架損傷的分子機制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

9 陳廷芳;整合素連接激酶在早期糖尿病腎病足細胞轉(zhuǎn)分化中的作用及大黃素對其的干預(yù)[D];蘇州大學(xué);2015年

10 梁偉;Nephrin在血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)足細胞表型改變中的作用及機制[D];武漢大學(xué);2009年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 方超;益氣養(yǎng)陰消ve通絡(luò)中藥對高糖培養(yǎng)足細胞裂孔膈膜蛋白的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

2 鄭婷娜;藕節(jié)對高糖環(huán)境下足細胞的保護作用及機制研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2016年

3 丁海華;小檗堿對糖尿病腎病大鼠腎臟的保護作用及對足細胞PI3K/Akt通路的影響[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2016年

4 陳曉雯;基于RNAKL/RANK介導(dǎo)NF-κB及MAPK通路研究二環(huán)丙化去氫木香烴內(nèi)酯保護高糖誘導(dǎo)足細胞的機制[D];南方醫(yī)科大學(xué);2016年

5 左洋洋;氧化低密度脂蛋白通過PTEN/SR-A途徑誘導(dǎo)足細胞損傷[D];南方醫(yī)科大學(xué);2016年

6 徐玄羽;小鼠足細胞特異敲除核因子-κB受體活化因子對蛋白尿的影響[D];南方醫(yī)科大學(xué);2016年

7 彭睿;miR-30a下調(diào)NFATc3抑制足細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2016年

8 梁斌;促腎上腺皮質(zhì)激素與轉(zhuǎn)化生長因子β1對足細胞表型的影響[D];蘇州大學(xué);2012年

9 黃鳳娟;胰淀素對足細胞的損傷及機制研究[D];鄭州大學(xué);2014年

10 于雪馨;鼠輸尿管梗阻后腎臟足細胞轉(zhuǎn)化的研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2008年

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本文編號：662778