發(fā)布時間：2017-08-08 04:12

  本文關(guān)鍵詞：IgA腎病尿液蛋白標志物的篩選及驗證

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【摘要】：背景和目的：IgA腎病(IgA nephropathy, IgAN)是我國乃至世界范圍內(nèi)最常見的原發(fā)性腎小球疾病,也是導致終末期腎病的最主要病因。目前臨床上對其診斷主要依賴腎活檢。多數(shù)IgAN是進展性疾病,而腎活檢作為有創(chuàng)操作不宜反復進行,因此尋找IgAN無創(chuàng)標志物具有重要意義。本研究通過檢測IgAN尿上清蛋白標志物,篩選出有助于IgAN病情診斷的蛋白分子標志物,并與臨床病理指標進行相關(guān)性分析,明確其臨床應用價值。方法：1、采用美國RayBiotech公司RayBio(?) AAH-CYT-G4000-8蛋白芯片檢測15例IgAN患者(Lee氏分級IgAN-I-II級、IgAN-III級、IgAN-IV-V級各5例),12例腎小球疾病對照組(Disease Control, DC)患者(微小病變MCD、膜性腎病MN、局灶節(jié)段性腎小球硬化FSGS,各4例)和5例健康對照組(NC)組尿上清蛋白標志物,篩選出有助于IgAN病情判斷的蛋白分子標志物；利用DAVID數(shù)據(jù)庫對差異蛋白進行GO功能(Gene Ontology)生物過程富集和信號通路分析(KEGG-PATHWAY),選擇組間差異顯著的蛋白進行下一步實驗。2、利用酶聯(lián)免疫吸附實驗(enzyme linked immune-sorbent assay, ELISA)技術(shù)對上述篩選的差異蛋白在49例IgAN患者(IgAN-Ⅰ-Ⅱ級8例、IgAN-Ⅲ級31例、IgAN-Ⅳ-Ⅴ級10例)、28例DC組患者(MN組8例、MCD組8例、FSGS組12例)和14例NC組中進行擴大樣本驗證,進一步明確其對IgAN病情評估的價值。對差異蛋白與臨床病理指標進行相關(guān)性分析,明確蛋白標志物對病情判斷的臨床意義。結(jié)果：利用蛋白芯片技術(shù)篩選IgAN與對照組間尿上清差異蛋白因子,共篩選出IgAN組與MCD組間差異蛋白8個;IgAN組與MN組間差異蛋白16個;IgAN組與NC組間差異蛋白1個。亞組分析顯示：IgAN-Ⅰ-Ⅱ級組與MCD組間差異表達的細胞因子6個;IgAN-Ⅰ-Ⅱ級與MN組間差異表達的細胞因子20個;IgAN-Ⅲ級與MN組間差異表達的細胞因子9個;IgAN-Ⅳ-Ⅴ級與NC組間、IgAN-Ⅳ-Ⅴ級與MN組間差異表達的細胞因子各3個；IgAN-Ⅰ-Ⅱ級與NC組間、IgAN-Ⅲ級組與NC組間、IgAN-Ⅰ-Ⅱ級與IgAN-Ⅳ-Ⅴ級間、IgAN-Ⅲ級與IgAN-Ⅳ-Ⅴ 級間差異表達的細胞因子各1個。為后期尋找IgAN特異性蛋白標志物提供來源。利用ELISA技術(shù)對部分蛋白因子進行驗證,發(fā)現(xiàn)IgAN組尿上清E-Cadherin水平顯著低于DC組(7.11±4.46 vs 13.92±7.65 ng/ml, p0.01), IgAN組尿上清E-Cadherin水平顯著低于MN組(7.11±4.46 vs 18.02±8.40ng/ml,p0.01)和FSGS組(7.11±4.46 vs 14.51±8.10ng/ml, p0.01); IgAN組HER2/ErbB2水平顯著低于DC組(121.84±125.95 vs 749.00±684.09 pg/ml, p0.01), HER2/ErbB2水平顯著低于MN組(121.84±125.95 vs 990.22±406.18pg/ml, p0.01)和MCD組(121.84±125.95 vs 1051.70±928.43 pg/ml, p0.01); Lyve-1水平顯著高于NC組(684.98±223.35 vs 62.12±76.43 pg/ml,p0.01); angiostatin在IgAN組水平顯著高于NC組(255.15±288.43 vs 3.31±5.96ng/ml, p0.05)但低于DC組(255.15±288.43 vs 499.98±314.24 pg/ml, p0.01)。進一步分析發(fā)現(xiàn),angiostatin水平顯著低于MN組(255.15±288.43 vs 579.47±211.69pg/ml, p0.01)和MCD組(255.15±288.43 vs 664.56±375.95 ng/ml, p0.05)。以上指標與臨床病理進行相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)angiostatin水平與SCr (r=0.939, p0.001)、BUN (r=0.931, p0.001), Cys C (r=0.923,p0.001), U-Prot (r=0.784, p0.001)硬化比例(r=0.718,p0.001)、新月體比例(r=0.588,p0.001)均呈正相關(guān),與 eGFR (r=-0.721, p0.001)呈負相關(guān)。另外,angiostatin在IgAN重度組(Lee氏分級IgAN-Ⅳ-Ⅴ級組)的水平顯著增高于IgAN-Ⅰ-Ⅱ級組(620.43±271.47 vs107.38±83.37 ng/ml, p0.01)和IgAN-Ⅲ級組(620.43±271.47 vs 117.89±143.84 ng/ml,p0.01),且在內(nèi)皮細胞增殖組表達水平顯著高于無內(nèi)皮細胞增殖組(406.95±336.56 vs 189.41±234.70,p0.01),節(jié)段硬化或粘連組的水平顯著高于無節(jié)段硬化或粘連組(311.54±338.58 vs 112.51±84.90,p0.01)。Angiostatin水平隨著腎小管萎縮、炎細胞浸潤和間質(zhì)纖維化程度的加重而增高,并且在重度間質(zhì)病變組的表達顯著高于其他組。結(jié)論：本研究首先采用蛋白芯片技術(shù)檢測IgAN尿上清蛋白標志物譜,篩選出可用于IgAN與對照組間具有顯著差異的蛋白標志物。對差異蛋白進行進一步驗證發(fā)現(xiàn),angiostatin在IgAN組與對照組間表達有顯著差異,并與臨床、病理指標具有很好相關(guān)性。Angiostatin可能是反應IgAN病變程度較特異的指標,可作為重度IgAN特異的分子標志物,但其作用機制及臨床應用需要進一步擴大樣本再驗證。
【關(guān)鍵詞】：IgA腎病 尿液 蛋白標志物 angiostatin
【學位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R692
【目錄】：

• 中英文縮略詞表5-7
• 中文摘要7-10
• Abstract10-13
• 第一部分 蛋白芯片技術(shù)高通量篩選IgA腎病尿上清蛋白標志物13-36
• 前言13-15
• 材料和方法15-23
• 實驗結(jié)果23-32
• 討論32-35
• 小結(jié)35-36
• 第二部分 IgA腎病尿上清蛋白標志物的驗證及與臨床病理相關(guān)性分析36-60
• 前言36-38
• 材料和方法38-42
• 實驗結(jié)果42-56
• 討論56-59
• 小結(jié)59-60
• 全文總結(jié)60-61
• 參考文獻61-68
• 文獻綜述68-83
• 參考文獻76-83
• 攻讀碩士學位期間研究成果83-84
• 致謝84-85

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本文編號：638153