本文關(guān)鍵詞：氧化苦參堿對腎缺血再灌注損傷的保護性作用的研究

  更多相關(guān)文章： 腎缺血再灌注損傷 氧化苦參堿 氧化應(yīng)激 細胞凋亡 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激

【摘要】：目的：探討氧化苦參堿(OMT)在腎缺血再灌注損傷(RIRI)中的保護性作用。方法：第一部分：首先進行OMT細胞毒性實驗,以0.1 mg/ml、0.5mg/ml、1.0mg/ml、 2mg/ml、4mg/ml、8mg/ml6個濃度梯度處理人腎小管上皮細胞HK-2細胞,于24h及48h朋CCK-8法檢測細胞活力。建立RIRI細胞模型：乏氧盒中無糖無血清培養(yǎng)2h模擬缺血狀態(tài),放回正常培養(yǎng)箱培養(yǎng)3h模擬再灌注狀態(tài)。參考毒性試驗結(jié)果,選用高、低兩種濃度OMT預(yù)處理HK-2細胞,與正常細胞同時造模,觀察細胞形態(tài)差異并檢測細胞活力,評估療效以確定后續(xù)實驗藥物濃度。使用最佳實驗濃度的OMT預(yù)處理HK-2細胞24h后進行造模(OMT+IR組),設(shè)置對照組：control組(正常培養(yǎng)),OMT組(OMT預(yù)處理24h后正常培養(yǎng)),IR組(與OMT+IR組同時鋪板造模,不加藥)。顯微鏡下觀察各組細胞形態(tài)學(xué)改變,并采用CCK-8法測細胞活力、流式細胞術(shù)Annexin V-FITC/PI雙染法定量檢測HK-2細胞凋亡情況,分析比較各組間數(shù)據(jù),評估OMT對于RIRI細胞模型的作用。qPCR法檢測各組細胞中PERK/ATF4/CHOP通路相關(guān)mRNA的表達,探索OMT保護性作用的可能機制。第二部分：將32只健康雄性ICR小鼠隨機分為sham組、OMT組、IR組及OMT+IR組,每組8只小鼠。OMT組及OMT+IR組術(shù)前連續(xù)4天及術(shù)后即刻腹腔注射給藥OMT 120mg/kg; sham組和IR組注射生理鹽水0.1ml。建立RIRI動物模型：手術(shù)切除右腎,游離左腎血管并以血管夾夾閉50min,腎臟顏色由紅變黑提示阻斷成功,松開阻斷后腎臟顏色由黑變紅提示再灌注成功。IR及OMT+IR組根據(jù)上述方法建模；sham和OMT組僅切除右腎、游離左腎血管,不阻斷血供。再灌注24h后收集血清標本及腎臟組織標本。檢測血清中肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)水平,評估腎臟功能；檢測組織中超氧化物歧化酶(SOD)活性及脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)的含量,評估氧化應(yīng)激水平；腎臟組織切片HE染色觀察組織形態(tài)學(xué)的改變,并進行組織病理學(xué)評分；Tunel法檢測腎臟組織細胞凋亡情況。分析比較各組間數(shù)據(jù),評估OMT對RIRI動物模型的作用。通過qPCR的方法檢測各組小鼠腎臟組織中PERK/ATF4/CHOP相關(guān)mRNA的表達,驗證體外實驗結(jié)果。結(jié)果：第一部分：細胞毒性試驗顯示：1mg/ml及更低濃度的OMT處理細胞48h,細胞活力較control組無明顯差異(P0.05)。藥物療效實驗顯示：模型組(包括IR組、OMT+IR組)細胞活力顯著低于control組(P0.01),OMT+IR組細胞活力高于瓜組(P0.05)。模型組顯微鏡下觀察可見明顯細胞凋亡壞死表現(xiàn),流式細胞儀分析發(fā)現(xiàn)模型組凋亡細胞明顯增多,相較對照組具有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P0.001),OMT+IR組細胞凋亡比例較IR組有所下降(P0.05)。模型組細胞中相關(guān)mRNA表達均顯著上升(P0.01)。OMT+IR組相關(guān)mRNA表達上升幅度低于IR組(P0.05)。第二部分：OMT+IR組小鼠血清Cr、BUN水平均明顯低于R組(85.74± 5.976 vs 127.6±13.210,P0.05；28.60±2.805 vs 41.46±3.966,P0.05);OMT+IR組小鼠腎臟組織中SOD活性較IR組有所升高(109.90±4.498 vs 85.50±4.114, P0.05),MDA含量低于IR組(6.033±0.2705 vs 7.136±0.4254,P0.05);OMT+IR組小鼠腎臟組織病理學(xué)評分明顯低于IR組(P0.05);OMT+R組小鼠腎臟組織凋亡細胞數(shù)較IR組明顯減少(P0.01)。相較于假手術(shù)組,模型組小鼠腎臟組織中相關(guān)mRNA表達均有上升(P0.01)。OMT+IR組相關(guān)mRNA表達上升幅度低于IR組(P0.05)。結(jié)論：1.OMT可顯著改善RIRI模型HK-2細胞的活力,減少細胞凋亡,即OMT對體外缺氧/復(fù)氧造成的HK-2細胞損傷有一定的保護性作用。2.OMT可顯著改善RIRI模型小鼠的腎臟功能、減輕腎臟組織的病理性改變,并能起到抗氧化應(yīng)激和抑制細胞凋亡的作用,即OMT對缺血再灌注造成的小鼠腎臟損傷有一定的保護性作用。3.體內(nèi)體外實驗均證實RIRI可使PERK/ATF4/CHOP信號通路關(guān)鍵mRNA表達上升；而OMT處理后相關(guān)mRNA表達下降,故推測阻礙PERK/ATF4/CHOP信號通路的激活,可能是OMT抑制細胞凋亡,減輕RIRI的關(guān)鍵機制之一。
【關(guān)鍵詞】：腎缺血再灌注損傷 氧化苦參堿 氧化應(yīng)激 細胞凋亡 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
【學(xué)位授予單位】：東南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R692
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 縮略詞表10-12
• 前言12-16
• 參考文獻14-16
• 文獻綜述16-23
• 參考文獻19-23
• 第一部分23-37
• 材料和方法23-31
• 實驗結(jié)果31-34
• 討論34-36
• 結(jié)論36-37
• 第二部分37-53
• 材料和方法37-45
• 實驗結(jié)果45-49
• 討論49-52
• 結(jié)論52-53
• 參考文獻53-55
• 致謝55-56
• 作者簡介56

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳樹杰;;苦參素對心肌缺血再灌注損傷大鼠氧化應(yīng)激和細胞凋亡的影響[J];現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志;2016年05期

2 張婧;范瑛;汪年松;;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與腎臟疾病[J];中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志;2016年01期

3 聶琛;高政;孫文芳;鄭瑞紅;;氟西汀預(yù)處理對SD大鼠腦缺血再灌注損傷的腦保護作用[J];大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2015年06期

4 周隆書;趙國龍;李明亮;房磊;王云;;氧化苦參堿預(yù)處理對大鼠缺血再灌注損傷心肌保護作用及其機制研究[J];寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2015年06期

5 付凱;袁逸民;蔣昊;邱雪峰;趙曉智;徐林鋒;郭宏騫;;蝦青素在小鼠腎臟缺血再灌注損傷方面的保護作用[J];東南大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2015年02期

6 Wanqing Chen;Rongshou Zheng;Hongmei Zeng;Siwei Zhang;Jie He;;Annual report on status of cancer in China, 2011[J];Chinese Journal of Cancer Research;2015年01期

7 周麗娜;王玉新;方林;武挺;余毅;;內(nèi)皮祖細胞修復(fù)缺血再灌注大鼠腎損傷[J];中國組織工程研究;2014年32期

8 程鋼;秦媛媛;程迪;楊磊;沈夕坤;黃玉宇;張慧靈;顧振綸;;氧化苦參堿對大鼠局灶性腦缺血損傷的保護作用及其抑制凋亡的作用機制[J];中國藥理學(xué)通報;2013年03期

9 向發(fā)良;黃贊松;黃衍強;周喜漢;;苦參素對人肝正常細胞L02影響的實驗研究[J];右江民族醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2013年01期

10 朱道立;王康樂;陳佩林;姜雅瓊;;氧化苦參堿對H_2O_2誘導(dǎo)的L_6成肌細胞凋亡的影響[J];生物化學(xué)與生物物理進展;2012年07期

，

本文編號：572218