本文關鍵詞：Cdc42信號蛋白在ACTH保護足細胞機制中的作用探討

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【摘要】：目的:通過觀察分析促腎上腺皮質激素(ACTH)作用于阿霉素(ADR)誘導損傷的足細胞后nephrin、podocin、actin以及cdc42蛋白表達的變化,來初步探討cdc42信號蛋白在ACTH保護足細胞的具體地位作用。方法:1.足細胞復蘇與培養(yǎng):將凍存于液氮中的條件永生型小鼠足細胞E11細胞快速融化后于33℃中增殖培養(yǎng),3~4天傳代一次,然后取生長至約90%的足細胞,胰酶消化后傳于T75瓶,于37℃無γ-干擾素條件下培養(yǎng)10 d使其分化,此時觀察足細胞生長分化形態(tài),若狀態(tài)良好時可用于試驗。2.實驗分組:將足細胞分為六組:正常對照組,阿霉素處理組(濃度為1μmol/L的阿霉素處理24小時),ACTH處理組(濃度為1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml的ACTH分別處理1h),ZCL278處理組(50u M ZCL278處理1h),阿霉素+ACTH處理組(濃度為1μmol/L的阿霉素處理24小時后再分別加入濃度為1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml的ACTH分別處理1h),阿霉素+ACTH+ZCL278處理組(濃度為1μmol/L的阿霉素處理24小時后再分別加入濃度為1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml的ACTH分別處理1h,然后再加入50u M ZCL278分別處理1h)。3.檢測指標:采用RT-PCR方法檢測nephrin、podocin、actin以及cdc42蛋白表達;采用Western-blotting技術對nephrin、podocin、actin以及cdc42蛋白表達進行檢測。結果:與正常對照組對比,阿霉素處理組nephrin和podocin的m RNA及蛋白表達明顯降低,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05),而cdc42和actin的m RNA及蛋白表達未有明顯降低。與正常對照組對比,ZCL278處理組cdc42和actin的m RNA及蛋白表達明顯降低,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05),而nephrin和podocin的m RNA及蛋白表達未有明顯降低。與正常對照組對比,中濃度ACTH處理組nephrin和podocin的m RNA及蛋白表達升高,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05),而cdc42和actin的m RNA及蛋白表達未有明顯升高。與低濃度和高濃度ACTH處理組相比,中濃度ACTH處理組nephrin和podocin的m RNA及蛋白表達升高,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。與阿霉素處理組相比,中濃度阿霉素+ACTH處理組nephrin和podocin的m RNA及蛋白表達明顯升高,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05),而cdc42和actin的m RNA及蛋白表達未有明顯升高。與正常對照組對比,阿霉素+ACTH+ZCL278處理組cdc42和actin的m RNA及蛋白表達明顯降低,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論:足細胞的nephrin和podocin結構蛋白是ACTH保護足細胞的的基礎,但這種保護作用并不是通過影響cdc42信號蛋白來表現(xiàn)的,但相信我們的研究能對未來的相關研究提供一些思路及幫助。
【關鍵詞】：足細胞 ACTH 阿霉素 cdc42蛋白 actin podocin nephrin
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R692
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-11
• 材料與方法11-18
• 實驗結果18-20
• 論文圖表20-26
• 討論26-29
• 結論29-30
• 參考文獻30-33
• 綜述33-44
• 參考文獻40-44
• 英文縮略詞表44-45
• 攻讀碩士期間公開發(fā)表的論文45-46
• 致謝46-47

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本文編號：537157