本文關(guān)鍵詞：補(bǔ)體B因子在常染色體顯性多囊腎病發(fā)病中的作用及機(jī)制研究

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【摘要】：研究目的:研究在常染色體顯性多囊腎病中,補(bǔ)體B因子的表達(dá)及可能的調(diào)控機(jī)制,并在體外條件下探討補(bǔ)體B因子在巨噬細(xì)胞分化中的作用。方法:1.收集ADPKD患者腎臟組織以及Han:SPRD大鼠腎臟組織,蛋白免疫印跡法和免疫組織化學(xué)法檢測PC1-CTT、CFB的表達(dá)以及JAK2/STAT1通路蛋白的活化情況。2.在UCL93細(xì)胞中轉(zhuǎn)染STAT1質(zhì)�；蚪o予STAT1特異性抑制劑Fludarabine后,蛋白免疫印跡法檢測p-STAT1的活化情況以及CFB的表達(dá)情況。3.在UCL93細(xì)胞中共轉(zhuǎn)染空載體和CFB啟動(dòng)子質(zhì)粒以及海腎熒光素酶質(zhì)粒作為對照組,共轉(zhuǎn)染STAT1質(zhì)粒和CFB啟動(dòng)子質(zhì)粒以及海腎熒光素酶質(zhì)粒作為實(shí)驗(yàn)組,雙熒光素酶報(bào)告基因體系檢測STAT1對CFB啟動(dòng)子的作用。4.在293T細(xì)胞中采用染色質(zhì)免疫共沉淀的方法檢測轉(zhuǎn)錄因子STAT1是否與CFB啟動(dòng)序列直接結(jié)合。5.在UCL93細(xì)胞中轉(zhuǎn)染PC1-CTT質(zhì)粒后給予STAT1抑制劑,蛋白免疫印跡法檢測p-STAT1的活化情況以及CFB的表達(dá)情況。6.在UCL93細(xì)胞中共轉(zhuǎn)染PC1-CTT質(zhì)粒+CFB-Pr+海腎熒光素酶質(zhì)粒,共轉(zhuǎn)染PC1-CTT質(zhì)粒+STAT1結(jié)合位點(diǎn)突變的CFB啟動(dòng)子質(zhì)粒+海腎熒光素酶質(zhì)粒,雙熒光素酶報(bào)告基因體系檢測CFB啟動(dòng)子活性。7.在UCL93細(xì)胞中共轉(zhuǎn)染PC1-CTT質(zhì)粒+空載體+CFB-Pr+Renilla,共轉(zhuǎn)染PC1-CTT質(zhì)粒+DN-STAT1+CFB-Pr+Renilla,雙熒光素酶報(bào)告基因體系檢測PC1-CTT對CFB啟動(dòng)子活性的作用。8.在UCL93細(xì)胞中轉(zhuǎn)染PC1-CTT質(zhì)粒后給予NF-κB抑制劑,蛋白免疫印跡檢測CFB和NF-κB通路蛋白的表達(dá),雙熒光素酶報(bào)告基因體系檢測CFB啟動(dòng)子活性。9.給予RAW264.7細(xì)胞人純化的補(bǔ)體B因子刺激和PC1-CTT-CM刺激,免疫印跡和RT-PCR法檢測RAW264.7細(xì)胞的分化情況。10.PC1-CTT-CM中阻斷補(bǔ)體B因子后培養(yǎng)RAW264.7細(xì)胞,免疫印跡法檢測RAW264.7細(xì)胞的分化情況。11.UCL93細(xì)胞給予STAT1抑制劑處理后,收集條件培養(yǎng)液培養(yǎng)RAW264.7細(xì)胞,免疫印跡法檢測RAW264.7細(xì)胞的分化情況。12.在UCL93細(xì)胞中轉(zhuǎn)染PC1-CTT質(zhì)粒后給予STAT1抑制劑,收集條件培養(yǎng)液培養(yǎng)RAW264.7細(xì)胞,免疫印跡法檢測RAW264.7細(xì)胞的分化情況。結(jié)果:1.與對照組相比,ADPKD患者和Cy/+Han:SPRD大鼠腎臟組織中CFB和PC1-CTT表達(dá)明顯增高,JAK2/STAT1通路明顯活化。2.PC1-CTT可通過JAK2-STAT1通路調(diào)控CFB的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。3.PC1-CTT-CM刺激RAW264.7細(xì)胞向M2型分化,該過程需STAT1和CFB參與。結(jié)論:常染色體顯性多囊腎病中,PC1-CTT通過JAK2-STAT1通路上調(diào)CFB表達(dá);PCT-CTT-CM誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞向M2型分化,該過程需STAT1和CFB參與。CFB可能成為治療和延緩ADPKD進(jìn)展的一個(gè)新靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：ADPKD STAT1 CFB 巨噬細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R692.1
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 縮略詞表11-13
• 前言13-15
• 第一部分 補(bǔ)體B因子在常染色體顯性多囊腎病中的調(diào)控機(jī)制15-49
• 前言15-17
• 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)17-21
• 材料與方法21-33
• 結(jié)果33-48
• 討論48-49
• 第二部分 PC1-CTT通過JAK2-STAT1-CFB通路對巨噬細(xì)胞分化的作用研究49-65
• 前言49-51
• 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)51-53
• 材料與方法53-57
• 結(jié)果57-63
• 討論63-65
• 全文總結(jié)65-66
• 參考文獻(xiàn)66-70
• 綜述70-78
• 參考文獻(xiàn)73-78
• 在讀期間完成和發(fā)表的文章78-79
• 致謝79

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本文編號(hào)：521968