發(fā)布時(shí)間：2017-06-10 11:05

  本文關(guān)鍵詞：CCN3對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的人腎小球系膜細(xì)胞胞外基質(zhì)代謝的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：腎小球硬化是慢性腎臟病進(jìn)展的重要機(jī)制,也是終末期腎衰形成的主要原因,其特征是腎小球系膜細(xì)胞增生、細(xì)胞外基質(zhì)大量沉積。近年來研究證實(shí),腎母細(xì)胞瘤過度表達(dá)蛋白(Nephroblastoma overexpressed gene, CCN3/NOV)具有抑制纖維化的作用,但是其對(duì)腎小球硬化的影響尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)旨在探討CCN3對(duì)腎小球系膜細(xì)胞胞外基質(zhì)沉積的影響,為防治腎小球硬化和CKD進(jìn)展提供新的思路。方法：1、體外培養(yǎng)人腎小球系膜細(xì)胞(Human Mesangial cell, HMC),使用不同濃度(0、0.5、1.0、2.0ng/m、1)轉(zhuǎn)化生長因子β1 (Transforming growth factor-β1, TGF-β1)作用HMC 24h,并且使用終濃度為2.0ng/ml的TGF-β1干預(yù)HMC不同時(shí)間(0、12、2、48 hour),運(yùn)用Western blot技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞CCN3蛋白表達(dá)情況。2、在無血清培養(yǎng)基中加入TGF-β1(2.0ng/ml)1小時(shí)前,外源性給予不同濃度(5ng/ml,50ng/ml,500ng/ml) CCN3干預(yù)人腎小球系膜細(xì)胞或建立高表達(dá)CCN3質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染人腎小球系膜細(xì)胞,具體分組如下：空白對(duì)照組、TGF-β1干預(yù)組(2ng/ml)、CCN3 (5ng/ml)+TGF-β1干預(yù)組、CCN3 (50ng/ml)+TGF-β1干預(yù)組、CCN3(500ng/ml)+TGF-β1干預(yù)組、TGF-β1+CCN3質(zhì)粒干預(yù)組、TGF-β1+空白質(zhì)粒干預(yù)組、CCN3質(zhì)粒干預(yù)組、空白質(zhì)粒干預(yù)組。Real Time-PCR技術(shù)檢測(cè)各組纖連蛋白(Fibronectin, FN)、I型膠原蛋白(Type I collagen, COLI)、基質(zhì)金屬蛋白酶-2(Matrix metalloproteinases-2, MMP-2)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(Matrix metalloproteinases-9, MMP-9)、金屬蛋白酶組織抑制因子-1(Tissue inhibitor of metalloproteinases-1,TIMP-1) mRNA表達(dá)情況,Western blot技術(shù)檢測(cè)各組FN、COLI、 MMP-2、MMP-9、TIMP-1蛋白表達(dá)水平,激光共聚焦顯微鏡技術(shù)檢測(cè)各組FN、COLI的表達(dá)情況。結(jié)果：(1)TGF-β1可抑制HMC CCN3蛋白的表達(dá),呈濃度和時(shí)間依賴性(終濃度為2.0ng/ml作用24小時(shí)抑制作用最強(qiáng))(P0.05)。(2)與正常對(duì)照組相比,TGF-β1組細(xì)胞FN及COLI蛋白及RNA表達(dá)明顯增加(P0.05),TGF-β1刺激前1小時(shí)給予不同濃度CCN3重組蛋白干預(yù)后可顯著抑制TGF-β1誘導(dǎo)的上述指標(biāo)的表達(dá)(P0.05)。其中,在CCN3濃度為5ng/ml時(shí)即可顯著抑制COLI及FN的表達(dá),抑制效應(yīng)呈濃度依賴性；(3)與正常對(duì)照組相比,TGF-β1組MMP-2、MMP-9蛋白及mRNA水平顯著降低(P0.05),TIMP-1蛋白及mRNA水平顯著升高(P0.05),TGF-β1刺激前1小時(shí)給予不同濃度CCN3重組蛋白干預(yù)后,MMP-2、MMP-9蛋白及mRNA表達(dá)均較TGF-β1干預(yù)組顯著上調(diào)而TIMP-1蛋白及mRNA表達(dá)較TGF-β1干預(yù)組顯著下調(diào)(P0.05)。(4)與TGF-β1組相比,內(nèi)源性轉(zhuǎn)染pcDNA-3.1 (+)-CCN3質(zhì)粒+TGF-β1干預(yù)組FN、COL1及TIMP-1蛋白及mRNA的表達(dá)均顯著降低,MMP-2、MMP-9蛋白及mRNA表達(dá)顯著升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05、P0.01)。結(jié)論：CCN3可通過抑制HMC胞外基質(zhì)的生成及促進(jìn)HMC胞外基質(zhì)降解抑制胞外基質(zhì)的沉積,在腎小球硬化的防治中具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。
【關(guān)鍵詞】：CCN3 TGF-β1 MMP 腎臟纖維化 腎小球硬化
【學(xué)位授予單位】：東南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R692
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 縮略詞10-12
• 前言12-14
• 文獻(xiàn)綜述 CCN3與纖維化14-19
• 第一部分 外源性CCN3對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的人腎小球系膜細(xì)胞胞外基質(zhì)代謝的影響19-42
• 實(shí)驗(yàn)材料和方法19-34
• 研究?jī)?nèi)容34-36
• 研究結(jié)果36-42
• 第二部分 內(nèi)源性CCN3對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的人腎小球系膜細(xì)胞胞外基質(zhì)代謝的影響42-57
• 實(shí)驗(yàn)材料和方法42-47
• 研究?jī)?nèi)容47-48
• 研究結(jié)果48-57
• 討論57-61
• 結(jié)論61-62
• 致謝62-63
• 參考文獻(xiàn)63-66
• 附錄66

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1 張瑩,張郁,孫葉方,史俊南;TGF-β對(duì)人牙乳頭間充質(zhì)細(xì)胞堿性磷酸酶的影響[J];牙體牙髓牙周病學(xué)雜志;1999年04期

2 周紅,馬忠森,王秀麗,安繼紅,赫國志;TGF_(β1)和TGF_βR在煤工塵肺大鼠模型肺組織中的表達(dá)[J];吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2003年02期

3 宋雅芳,洪嘉禾,徐列明;中醫(yī)藥對(duì)TGF-β1調(diào)控作用的研究進(jìn)展[J];上海中醫(yī)藥雜志;2004年01期

4 鄒貴勉,張t

本文編號(hào)：438224