本文關(guān)鍵詞：靶向沉默膀胱癌T24細(xì)胞VEGF基因?qū)C分化成熱及免疫功能的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:利用RNA干擾(RNA interfering,RNAi)技術(shù),靶向沉默膀胱癌T24細(xì)胞血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因的表達(dá),通過將T24細(xì)胞培養(yǎng)上清與外周血單個(gè)核細(xì)胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)來源的樹突狀細(xì)胞(Dendritic cells,DC)共培養(yǎng),來模擬在膀胱癌微環(huán)境下,膀胱癌細(xì)胞分泌VEGF對DC細(xì)胞的發(fā)育成熟和免疫功能的影響。同時(shí)探討膀胱癌微環(huán)境中的VEGF參與癌細(xì)胞免疫逃逸、影響DC抗腫瘤效應(yīng)的機(jī)制,進(jìn)一步為后續(xù)臨床上制備DC疫苗治療膀胱癌提供更全面的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:實(shí)驗(yàn)設(shè)置三個(gè)組,分別為:感染組、空載體組以及未感染組。構(gòu)建針對VEGF基因的慢病毒干擾載體LV-VEGFA-RNAi以及無有效干擾序列的空載體慢病毒LV-CON(兩種慢病毒載體均帶有增強(qiáng)型綠色熒光蛋白),分別感染各組T24細(xì)胞,未感染組不采取任何干預(yù)措施。采用熒光顯微鏡觀察感染組及空載體組細(xì)胞熒光表達(dá)情況,驗(yàn)證感染成功,使用倒置顯微鏡觀察未感染組細(xì)胞生長情況。采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)、實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增檢測(q PCR)以及酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)分別檢測各組T24細(xì)胞VEGF m RNA和蛋白表達(dá),并將各組T24細(xì)胞培養(yǎng)上清分別與未成熟DC(PBMC)共培養(yǎng),采用流式細(xì)胞儀檢測DC細(xì)胞分化成熟指標(biāo)CD1a、CD83以及免疫功能指標(biāo)CD86等。采用SPSS17.0軟件對數(shù)據(jù)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果:慢病毒干擾載體成功感染膀胱癌T24細(xì)胞后對各組均產(chǎn)生了一定的損傷,感染組和空載體組均有一定比例的細(xì)胞死亡,可見細(xì)胞碎片。與未感染組相比,感染組膀胱癌T24細(xì)胞VEGF m RNA及蛋白的表達(dá)均受到顯著抑制(P0.05),細(xì)胞生長變緩。與空載體組相比,感染組膀胱癌T24細(xì)胞VEGF m RNA及蛋白的表達(dá)亦受到明顯抑制(P0.05),細(xì)胞生長亦明顯變緩。而空載體與未感染組相比,T24細(xì)胞VEGF m RNA及蛋白的表達(dá)量差異不明顯(P0.05)。各組膀胱癌T24細(xì)胞的培養(yǎng)上清液與未成熟DC共培養(yǎng)之后,感染組中反應(yīng)DC分化成熟的表型CD1a、CD83及免疫功能表型CD86較未感染組有明顯增高(P0.05),較空載體組亦有明顯增高(P0.05),而空載體組與未感染組中反應(yīng)DC分化成熟及免疫功能的表型無明顯差異(P0.05)。結(jié)論:VEGF是腫瘤微環(huán)境中的一個(gè)極為重要的免疫抑制因子,而DC是目前發(fā)現(xiàn)的體內(nèi)功能最強(qiáng),唯一能激活初始型T淋巴細(xì)胞的抗原遞呈細(xì)胞(Antigen-presenting cell,APC),也是腫瘤微環(huán)境中的主要抗原遞呈細(xì)胞,在機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)中發(fā)揮極為重要的作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:膀胱癌T24細(xì)胞分泌VEGF,可抑制DC細(xì)胞的分化成熟以及免疫功能,這可能與膀胱癌的免疫逃避有關(guān)。通過RNAi技術(shù)可靶向沉默膀胱癌細(xì)胞的VEGF表達(dá),有利于微環(huán)境中的DC細(xì)胞發(fā)育成熟及免疫功能的發(fā)揮,可能通過修復(fù)DC被損害的免疫監(jiān)視功能,增加DC細(xì)胞的抗腫瘤能力。
【關(guān)鍵詞】：膀胱癌 微環(huán)境 VEGF DC
【學(xué)位授予單位】：西南醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.14
【目錄】：

• 英漢縮略詞對照表3-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-15
• 材料與方法15-28
• 結(jié)果28-46
• 討論46-54
• 結(jié)論54
• 參考文獻(xiàn)54-59
• 致謝59-60
• 非肌層浸潤性膀胱癌診治現(xiàn)狀及進(jìn)展（綜述）60-72
• 參考文獻(xiàn)67-72

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本文編號：434847