本文關(guān)鍵詞：Pim1通過調(diào)節(jié)核糖體生物合成影響前列腺癌發(fā)生發(fā)展的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的明確Pim1對(duì)前列腺癌細(xì)胞的核糖體生物合成的影響,并初步揭示其作用機(jī)制方法通過構(gòu)建Pim1 shRNA,并用其轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞,經(jīng)擴(kuò)增后提取高濃度質(zhì)粒,隨后用Pim1 shRNA轉(zhuǎn)染PC3細(xì)胞,通過含有嘌呤霉素的培養(yǎng)基篩選后,行單克隆細(xì)胞培養(yǎng),即得到穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染株;分別應(yīng)用實(shí)時(shí)定量qPCR及蛋白質(zhì)免疫印跡技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中Pim1的mRNA表達(dá)量以及蛋白水平;運(yùn)用蔗糖梯度離心技術(shù)分離前列腺癌PC3細(xì)胞系的核糖體,并提取各層離心產(chǎn)物的蛋白質(zhì)成分,利用Westernblot檢測Pim1的分布規(guī)律,了解其與核糖體各亞基是否存在相互作用關(guān)系;使用蔗糖梯度離心技術(shù)分別分離PC3、Pim1低表達(dá)PC3細(xì)胞系及Pim1低表達(dá)陰性對(duì)照PC3細(xì)胞系的核糖體,利用UV檢測器檢測核糖體各亞基的含量在3種細(xì)胞系中的差異;進(jìn)一步運(yùn)用RT-qPCR檢測在受影響亞基中具體受影響的核糖體蛋白。所有需要統(tǒng)計(jì)分析的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)全部使用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS18.0進(jìn)行分析。結(jié)果1.Pim1 shRNA轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞在擴(kuò)增后提取獲得了高濃度的Pim1shRNA;通過Lipofectamine2000介導(dǎo)將Pim1 shRNA成功轉(zhuǎn)染入PC3細(xì)胞,通過嘌呤霉素培養(yǎng)篩選及單克隆細(xì)胞培養(yǎng),RT-qPCR及westernblot檢測單克隆細(xì)胞株中Pim1穩(wěn)定低表達(dá);2.蔗糖梯度離心及Westernblot檢測發(fā)現(xiàn)Pim1的分布與核糖體40S小亞基、80S核糖體及多聚核糖體的分布密切相關(guān),而與核糖體60S大亞基的分布無關(guān),其差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;3.蔗糖梯度離心及UV檢測器檢測發(fā)現(xiàn)Pim1低表達(dá)時(shí),核糖體40S小亞基、80S核糖體及多聚核糖體的表達(dá)降低;RT-qPCR檢測發(fā)現(xiàn),Pim1低表達(dá)時(shí),核糖體40S小亞基的RPS6、RPS21的表達(dá)水平降低。結(jié)論1.Pim1的分布與核糖體40S小亞基、80S核糖體及多聚核糖體的分布密切相關(guān),而與核糖體60S大亞基的分布無關(guān),其差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,表明Pim1可與核糖體40S小亞基、80S核糖體及多聚核糖體相互作用;2.Pim1低表達(dá)時(shí),核糖體40S小亞基、80S核糖體及多聚核糖體的表達(dá)降低;RT-qPCR檢測發(fā)現(xiàn),Pim1低表達(dá)時(shí),核糖體40S小亞基的RPS6、RPS21的表達(dá)水平降低。表明Pim1可以通過影響核糖體小亞基中RPS6、RPS21的表達(dá),影響核糖體40S小亞基、80S核糖體及多聚核糖體的生物合成,影響了前列腺癌的發(fā)生發(fā)展。
【關(guān)鍵詞】：前列腺癌 Pim1 核糖體生物合成
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.25
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 縮略語/符號(hào)說明9-11
• 前言11-16
• 研究現(xiàn)狀、成果11-15
• 研究目的、方法15-16
• 對(duì)象和方法16-35
• 結(jié)果35-44
• 討論44-49
• 結(jié)論49-50
• 參考文獻(xiàn)50-56
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明56-57
• 綜述 Pim1作為腫瘤治療靶點(diǎn)的研究進(jìn)展57-77
• 綜述參考文獻(xiàn)67-77
• 致謝77

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本文編號(hào)：397509