研究背景及目的： 誘導(dǎo)多能干細胞（Induced pluripotent stem cells，iPS）是目前干細胞與組織再生研究領(lǐng)域的一項重大突破，因為其解決了胚胎干細胞來源有限和倫理學(xué)障礙的難題，在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域展示了廣闊的應(yīng)用前景。腎臟疾病發(fā)展到終末期都需要腎移植等替代治療，干細胞移植是治療腎臟疾病的理想治療方式，但有關(guān)iPS細胞在腎臟再生領(lǐng)域的研究較少。本文旨在建立iPS細胞向腎臟前體細胞定向分化的體外誘導(dǎo)培養(yǎng)技術(shù)體系，觀察iPS細胞來源的腎臟前體細胞在動物模型體內(nèi)腎臟組織中的存活及分化能力，以及對大鼠腎缺血再灌注損傷的修復(fù)作用，探討其作用機制，為iPS細胞在腎臟疾病方面的再生治療提供實驗依據(jù)。 方法： 1體外誘導(dǎo)iPS細胞向腎臟前體細胞分化 1) iPS細胞的培養(yǎng)：從胎鼠獲得小鼠胚胎成纖維細胞（mouse embryonic fibroblasts，MEF），傳至第3代，用γ射線輻照處理后凍存。MEF作為飼養(yǎng)層細胞，iPS細胞接種在飼養(yǎng)層細胞上培養(yǎng)，正常傳代、擴增。 2)擬胚體（embryonic body，EB）的培養(yǎng)：iPS細胞用去除白血病抑制因子（leukemiainhibi...

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【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖1-1PCR循環(huán)示意圖

上游引物（10μM）0.8μl0.4μM下游引物（10μM）0.8μl0.4μM樣品溶液2μlTotalvolume20μl每個指標在定量時均進行三復(fù)孔重復(fù)，進一步保證結(jié)果的準確。2)步驟1配置的PCR反應(yīng)溶液置于RealtimePCR儀上進行....

圖1-2iPS細胞培養(yǎng)及誘導(dǎo)過程中的細胞形態(tài)學(xué)觀察（相差顯微鏡下觀察：AiPS細胞在飼養(yǎng)層細胞上生長；B懸浮培養(yǎng)第二天的EB；CEB貼壁誘導(dǎo)培養(yǎng)第一天；DEB誘導(dǎo)培養(yǎng)第三天；EREGM誘導(dǎo)培養(yǎng)第一天；FREGM誘導(dǎo)培養(yǎng)第五天

29圖1-2iPS細胞培養(yǎng)及誘導(dǎo)過程中的細胞形態(tài)學(xué)觀察顯微鏡下觀察：AiPS細胞在飼養(yǎng)層細胞上生長；B懸浮培養(yǎng)第二天的E培養(yǎng)第一天；DEB誘導(dǎo)培養(yǎng)第三天；EREGM誘導(dǎo)培養(yǎng)第一天；FREG�！�100）Cellmorphologicalobservatio....

圖1-73組誘導(dǎo)培養(yǎng)的細胞中腎臟發(fā)育調(diào)控因子的轉(zhuǎn)錄水平變化

1-73組誘導(dǎo)培養(yǎng)的細胞中腎臟發(fā)育調(diào)控因子的轉(zhuǎn)錄水平變化igure1-7Transcriptionallevelchangesofregulatoryfactorsinvolvedinkidneydevelopmentinnductioncultu....

圖1-8流式細胞技術(shù)檢測3組中Pax2、Bry、WT1、E-cadherin、CD24陽性細胞的比例Figure1-8FlowcytometrytechnologydetectstheproportionofPax2+、Bry+、WT1+、E-cadherin+andCD24+cellsamongthreeGroups.討論

321-8流式細胞技術(shù)檢測3組中Pax2、Bry、WT1、E-cadherin、CD24陽性細胞的比例igure1-8FlowcytometrytechnologydetectstheproportionofPax2+、Bry+、WT1+、E-cad....

本文編號：3973164