目的:通過基因技術(shù)尋找到與腹膜透析相關(guān)性腹膜纖維化相關(guān)聯(lián)的miRNA,體內(nèi)及體外實驗驗證其表達變化,明確該miRNA是否參與到腹膜纖維過程。并通過RNA干擾技術(shù),觀察miRNA對腹膜纖維化關(guān)鍵環(huán)節(jié)腹膜間皮細胞間質(zhì)轉(zhuǎn)分化的影響。通過miRNA靶基因預(yù)測網(wǎng)站,篩選miR-200a下游作用靶基因,觀察miR-200a對其調(diào)控作用,探討miR-200a對腹膜間皮細胞EMT的調(diào)控機制。方法:1、體內(nèi)實驗:隨機選取6只雄性SD大鼠,平均分為對照組及實驗組。實驗組:腹腔注射脂多糖(LPS)+高糖腹透液液,從而構(gòu)建腹膜纖維化小鼠模型;對照組:腹腔注射生理鹽水。通過基因芯片法檢測小鼠腹膜組織miRNA相關(guān)表達譜,尋找相關(guān)差異表達的miRNAs。再通過擴大實驗樣本量,利用real time PCR法驗證差異miRNA(miR-200a)表達水平是否與基因芯片結(jié)果相符。2、體外實驗:利用轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β1)刺激腹膜間皮細胞,建立體外上皮細胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化(EMT)模型,分別用Western印跡、細胞免疫熒光、PCR等實驗方法來檢測人腹膜間皮細胞中Ⅰ型膠原(Col-Ⅰ)、α平滑肌肌動蛋白(α-SMA...

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
中英文縮略詞表
第1章 前言
第2章 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 細胞株
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器及耗材
    2.2 方法
        2.2.1 配置實驗所需溶液
        2.2.2 大鼠腹膜纖維化模型建立及檢測
        2.2.3 細胞實驗方法
        2.2.4 細胞轉(zhuǎn)染
        2.2.5 實驗分組
        2.2.6 western blot分析各處理組蛋白的相對表達量
        2.2.7 細胞免疫熒光分析蛋白的表達及定位
        2.2.8 RT- PCR檢測各組m RNA的表達
        2.2.9 PCR檢測各組miR-200a的表達
        2.2.10 統(tǒng)計學(xué)處理
第3章 結(jié)果
    3.1 大鼠模型的建立
    3.2 纖維化腹膜組織中miRNA表達譜變化
    3.3 建立體外EMT模型
    3.4 miR-200a在體外腹膜間皮細胞EMT過程中的表達
    3.5 miR-200a對EMT指標影響
    3.6 篩選miR-200a靶基因
    3.7 ZEB1/2 在體外腹膜間皮細胞EMT過程中的表達
    3.8 上調(diào)miR-200a對ZEB1/2 表達影響
第4章 討論
第5章 結(jié)論
致謝
參考文獻
綜述 微小RNA與長期腹膜透析后腹膜纖維化的研究進展
    參考文獻



本文編號：3837577