目的:本研究通過(guò)構(gòu)建pGC-FU-LL37-GFP慢病毒表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染多能誘導(dǎo)干細(xì)胞,在實(shí)現(xiàn)目的基因LL37穩(wěn)定表達(dá)的前提下,驗(yàn)證其在組織工程中的促血管生成作用,并誘導(dǎo)iPSCs細(xì)胞分化為尿路上皮細(xì)胞,達(dá)到在體外獲取種子細(xì)胞的目的。方法:(1)目的基因LL37的提取;(2)pGC-FU-LL37-GFP慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建及測(cè)序鑒定;(3)pGC-FU-LL37-GFP慢病毒表達(dá)載體對(duì)小鼠多能誘導(dǎo)干細(xì)胞的轉(zhuǎn)染及鑒定;(4)通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)、血管成形實(shí)驗(yàn)證實(shí)轉(zhuǎn)染后的iPSCs細(xì)胞的促血管生成能力;(5)誘導(dǎo)染后的iPSCs細(xì)胞向尿路上皮細(xì)胞分化,并鑒定分化后的細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)用GraphPad Prism 8軟件繪制統(tǒng)計(jì)結(jié)果圖,應(yīng)用IBM SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。結(jié)果:(1)qPCR結(jié)果證實(shí)慢病毒表達(dá)載體pGC-FU-LL37-GFP構(gòu)建成功,并且測(cè)序結(jié)果與目標(biāo)序列完全一致;(2)在轉(zhuǎn)染后的iPSCs細(xì)胞內(nèi),目的基因LL37融合了GFP共同表達(dá);(3)qPCR檢測(cè)iPSCs細(xì)胞內(nèi)目的基因LL37 m RNA表達(dá)量較對(duì)照組提高(P<0.01);(4)...

【文章頁(yè)數(shù)】：45 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
第一章 材料與方法
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        1.3 主要儀器和實(shí)驗(yàn)器械
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 復(fù)合抗菌肽LL37的慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2 pGC-FU-LL37-GFP慢病毒表達(dá)載體轉(zhuǎn)染i PSCs細(xì)胞
        2.3 轉(zhuǎn)基因i PSCs細(xì)胞對(duì)HUVECs細(xì)胞的功能實(shí)驗(yàn)
        2.4 轉(zhuǎn)染 pGC-FU-LL37-GFP 后的 iPSCs 細(xì)胞向尿路上皮細(xì)胞的分化實(shí)驗(yàn)
    3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
第二章 結(jié)果
    1 目的基因LL37的擴(kuò)增
    2 目的基因的鑒定
        2.1 重組質(zhì)粒載體PCR鑒定
        2.2 目的基因LL37陽(yáng)性克隆測(cè)序
        2.3 pGC-FU-LL37-GFP慢病毒表達(dá)載體轉(zhuǎn)染鑒定
    3 轉(zhuǎn)基因iPSCs細(xì)胞作用于HUVEC細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 HUVEC增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.2 HUVECs細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)
        3.3 iPSCs細(xì)胞對(duì)HUVECs細(xì)胞促血管生成作用的檢測(cè)
    4 轉(zhuǎn)染pGC-FU-LL37-GFP的 iPSCs細(xì)胞向尿路上皮細(xì)胞分化結(jié)果
第三章 討論
第四章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    綜述參考文獻(xiàn)
附錄 (縮略詞表)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
致謝



本文編號(hào)：3777563