目的:探討TRIP13對膀胱癌的增殖耐藥機制以及靶標藥物的作用機制。方法:1)通過分析TCGA和GEP數(shù)據(jù)庫中腫瘤患者與正常對照組的臨床數(shù)據(jù)樣本,分析組織表達、生存曲線,探究TRIP13與腫瘤之間的關系。2)構建TRIP13過表達以及敲低的T24和J82細胞株,Western blot檢測細胞轉染情況;MTT法和克隆形成實驗檢測細胞增殖能力;細胞周期檢測細胞生長周期分布;Annexin-V APC/PI雙染法,流式細胞術檢測細胞凋亡情況;免疫熒光檢測γH2AX,檢測TRIP13對DNA損傷的影響;Western blot檢測MAD2、RAD50、γH2AX蛋白表達,闡明TRIP13促進腫瘤增殖耐藥的機制。3)應用MTT法檢測VCP17和VCP20對腫瘤細胞活性的影響;使用Annexin-V APC/PI雙染法檢測細胞凋亡情況,同時用Western blot法檢測凋亡蛋白如PARP、Casepase 3的表達情況;應用細胞周期檢測細胞周期分布情況,同時檢測細胞周期相關蛋白如Cyclin B1;使用TRAP染色探究VCP17和VCP20對破骨細胞分化的影響,同時用實時熒光定量PCR,檢測多... 

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
第一部分 研究背景
    1. 中醫(yī)對腫瘤的認識
    2. TRIP13在腫瘤中的作用
        2.1 TRIP13在細胞中的生物學功能
        2.2 TRIP13過表達與人類腫瘤有關
        2.3 TRIP13異常表達可導致腫瘤發(fā)生
        2.4 TRIP13升高促進腫瘤進展
        2.5 TRIP13導致腫瘤細胞對化療藥物的敏感性降低
        2.6 靶向TRIP13可能是治療腫瘤的一個前景
第二部分 實驗研究
    實驗一: TRIP13促進腫瘤增殖及耐藥機制探究
        1. 實驗材料
            1.1 實驗試劑
            1.2 試劑配制
            1.3 主要耗材
            1.4 細胞株及培養(yǎng)條件
        2 實驗儀器
        3 實驗方法
            3.1 細胞培養(yǎng)
            3.2 質粒制備及抽提
            3.3 細胞構建
            3.4 細胞增殖毒性檢測
            3.5 免疫印跡(Westem-Blot)
            3.6 細胞周期檢測
            3.7 細胞凋亡檢測
            3.8 細胞克隆實驗
            3.9 γH2AX免疫熒光
            3.10 統(tǒng)計學分析
        4 實驗結果
            4.1 TRIP13過表達與膀胱癌預后不良相關
            4.2 敲低TRIP13抑制T24和J82細胞株生長并誘導凋亡
            4.3 過表達TRIP13促進T24和J82細胞株生長
            4.4 高表達TRIP13增強T24和J82細胞株的耐藥性
            4.5 TRIP13通過抑制SAC信號和DNA損傷起到致癌作用
        5 討論
    實驗二: 新型小分子靶向化合物作用機制研究
        1 實驗材料
            1.1 實驗試劑
            1.2 主要耗材
            1.3 化合物
            1.4 細胞株及培養(yǎng)條件
            1.5 實驗動物
        2 實驗儀器
        3 實驗方法
            3.1 小鼠皮下MM移植瘤模型的建立
            3.2 抗酒石酸酸性磷酸酶染色(TRAP染色)
            3.3 細胞核蛋白和漿蛋白提取
            3.4 實時熒光定量PCR
            3.5 骨髓瘤小鼠模型的建立
            3.6 免疫印跡(Western-Blot)
            3.7 細胞增殖毒性檢測
            3.8 細胞周期檢測
            3.9 細胞凋亡檢測
        4 實驗結果
            4.1 VCP17、VCP20化合物的來源及結構
            4.2 VCP17、VCP20能抑制腫瘤細胞的活性
            4.3 VCP17、VCP20能將ARP1和H929細胞阻滯于G2/M
            4.4 VCP17、VCP20能誘導ARP1和H929細胞凋亡
            4.5 VCP17、VCP20能抑制NF-κB信號通路
            4.6 VCP17、VCP20能抑制RAW264.7細胞的分化
            4.7 VCP17、VCP20對多種細胞因子的影響
            4.8 VCP17、VCP20能抑制小鼠皮下移植瘤的生長
            4.9 VCP17、VCP20在骨髓瘤小鼠模型中的作用
            4.10 VCP17、VCP20聯(lián)合硼替佐米(BTZ)抑制ARP1和H929細胞的增殖
        5 討論
第三部分 總結展望
    課題結論
    不足與展望
參考文獻
附錄
攻讀碩士期間取得的學術成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3651725