本文關鍵詞：siRNA沉默人類血紅素敏感基因-1對膀胱癌細胞的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景及目的世界范圍內,膀胱癌(bladder cancer,BC)發(fā)病率居惡性腫瘤的第十一位,在男性排名第七位,女性排在第十位之后。在初步診斷中,大約70%至80%的膀胱癌是非肌層浸潤性的膀胱癌(non muscle-invasive bladder cancer,NMIBC),其余的20%至30%是肌層浸潤性的膀胱癌(muscle-invasive bladder cancer,MIBC)。雖然這兩種膀胱癌從病理上分析都是膀胱尿路上皮起源的病變,但是它們有著明顯不同的臨床特點。而與人體其他的惡性腫瘤相比,非肌層浸潤性膀胱癌患者的總體生存率相對較高,但是其中30%至50%的患者在切除原發(fā)腫瘤后具有復發(fā)的可能,還有10%至20%的NMIBC患者進展到MIBC。雖然在初診時,只有20%的膀胱癌患者被診斷為MIBC,但是這些惡性腫瘤患者絕大多數(shù)都進展為死亡,此外將近50%的MIBC患者在初診時已經發(fā)現(xiàn)了隱匿性遠處轉移[1]。NMIBC患者是否復發(fā)及進展到MIBC的高危因素,以及MIBC患者發(fā)生轉移的預后都是我們臨床工作者及實驗者所關心及待解決的主要問題,所以膀胱癌早期診斷及治療已變得尤為重要。人類血紅素敏感基因1(heme-responsive gene 1,HRG-1)是我校實驗室發(fā)現(xiàn)的一種與腫瘤細胞凋亡有關的新基因,是溶質轉運蛋白家族48(solute carriers,SLC48)的唯一成員,主要與核內體相關聯(lián),將血紅素從核內體運輸進入細胞質。SLC48A1/HRG-1與V-ATP酶酸化內涵體相互作用,增加V-ATP酶的活性,其可介導增加細胞膜轉運體和受體再循環(huán)。我校前期的研究發(fā)現(xiàn)HRG-1在前列腺癌組織中高表達,而在前列腺增生組織中低表達或者不表達,這也為我們提供了理論依據。文獻報道HRG-1與V-ATP酶存在相互作用,而V-ATP酶參與了腫瘤的發(fā)生及侵襲,這也為我們研究膀胱腫瘤高復發(fā)提供了思路。本課題目的是探討HRG-1在膀胱癌與膀胱正常組織中的表達情況,通過si RNA干涉技術,轉染目的細胞,從而調節(jié)HRG-1在膀胱癌細胞中的表達情況,觀察其對膀胱癌細胞增殖及凋亡的影響,為臨床上治療及評估惡性腫瘤預后提供理論基礎。研究方法及內容1、觀察人類血紅素敏感基因1(HRG-1)在正常膀胱組織和不同級別膀胱癌組織中的表達情況,分析HRG-1基因是否能為膀胱癌患者的診斷及治療提供一定的依據。2、通過蛋白印跡法和實時定量PCR的方法,檢測正常膀胱上皮細胞SV-HUC-1及T24、5637、BIU-87三組膀胱癌細胞系中HRG-1基因表達情況,并篩選出HRG-1表達最高的一組膀胱癌細胞,作為后續(xù)研究所用細胞。3、用si RNA干涉技術將HRG-1 si RNA轉染到膀胱癌T24細胞中,使用實時定量PCR和蛋白印跡法來檢測HRG-1 si RNA在膀胱癌T24細胞中的表達變化。4、MTT法和流式細胞儀檢測干涉HRG-1的表達對膀胱癌T24細胞的增殖及凋亡的影響。實驗結果1、HRG-1在膀胱正常組織和膀胱腫瘤組織中的陽性表達率分別為25%(5/20)、71.8%(61/85)。HRG-1在膀胱腫瘤組織中的陽性表達率明顯高于正常膀胱組織,并且HRG-1在膀胱組織中的表達情況與與腫瘤的病理分期呈正相關,但與患者的性別、年齡無相關性。2、通過免疫蛋白印跡法(Western-blot)和實時定量RT-PCR法對正常膀胱上皮細胞SV-HUC-1及膀胱癌T24、5637和BIU-87細胞進行檢測,發(fā)現(xiàn)HRG-1在正常膀胱上皮細胞SV-HUC-1中的表達明顯低于膀胱癌T24、5637和BIU-87細胞中的表達,且在三組膀胱癌細胞系中T24細胞中表達水平最高。3、HRG-1 si RNA能有效下調T24細胞中HRG-1的表達:經轉染48 h后,收集細胞,提取蛋白及m RNA通過Western blot及real-time PCR檢測轉染si RNA組、NC組及未處理組T24細胞中HRG-1蛋白及m RNA水平,結果顯示si RNA沉默組HRG-1蛋白及m RNA明顯下調。4、下調HRG-1后T24細胞增殖能力減弱,通過MTT實驗檢測發(fā)現(xiàn),轉染HRG-1si RNA組細胞增殖速率比對照組及空白組細胞增殖速率慢,且在第48h后p0.01;下調HRG-1后T24細胞凋亡增加,通過流式細胞術檢測轉染HRG-1 si RNA 24h及48h后細胞凋亡情況,與對照組及空白組相比凋亡率明顯增加。結論1、HRG-1在膀胱腫瘤組織中高表達,在正常膀胱組織中低表達甚至不表達,且表達情況與病理分期呈正相關,說明HRG-1的表達與膀胱腫瘤的惡性程度及進展密切相關。2、HRG-1在正常膀胱上皮細胞SV-HUC-1中的表達明顯低于膀胱癌細胞T24、5637及BIU-87中的表達,且下調膀胱癌T24細胞中HRG-1的表達后,細胞增殖能力下降,細胞凋亡率增加,說明下調HRG-1的表達可以抑制T24細胞的增殖、促進T24細胞的凋亡。
【關鍵詞】：膀胱癌 HRG-1 siRNA 增殖
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.14
【目錄】：

• 縮略語表4-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-14
• 文獻回顧14-21
• 實驗一HRG-1 在膀胱組織中的表達分析21-27
• 1 材料21-22
• 2 方法22-24
• 3 結果24-25
• 4 討論25-27
• 實驗二siRNA沉默HRG-1 基因對膀胱癌T24細胞的影響27-37
• 1 材料27-28
• 2 方法28-31
• 3 結果31-35
• 4 討論35-37
• 小結37-39
• 參考文獻39-46
• 個人簡歷和研究成果46-47
• 致謝47

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本文編號：357517