發(fā)布時間：2017-05-07 20:02

  本文關鍵詞：Intermedin對血管緊張素Ⅱ誘導的NRK-52E細胞纖維化的影響及機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:觀察intermedin(IMD)對血管緊張素Ⅱ(Ang Ⅱ)誘導的大鼠近端腎小管上皮細胞系NRK-52E纖維化的影響,并探討其機制。方法:體外培養(yǎng)的NRK-52E細胞,隨機分為4組:正常對照組、Ang Ⅱ干預組(10-6mol/L)、轉染IMD質(zhì)粒+Ang Ⅱ干預組、轉染空質(zhì)粒+Ang Ⅱ干預組。采用Fugene HD轉染試劑,將p IRES2-EGFP空質(zhì)粒和p IRES2-IMD真核表達質(zhì)粒分別轉染至NRK-52E細胞,應用流式細胞儀檢測轉染效率,轉染成功48 h后用Ang Ⅱ(10-6mol/L)干預24 h。用real-time RT-PCR檢測各組細胞中I型膠原(Col I)的表達;Western印跡法檢測Col I、E-鈣黏蛋白(E-cadherin)的表達;ELISA法檢測細胞培養(yǎng)上清液內(nèi)皮型一氧化氮合酶(e NOS)、環(huán)磷酸鳥苷(c GMP)的濃度。結果:通過熒光顯微鏡觀察轉染成功后細胞的EGFP表達,流式細胞術檢測細胞轉染效率為(35.73±7.28)%。與正常對照組相比,Ang Ⅱ組Col I的表達顯著上調(diào)(m RNA水平t=4.835,P=0.008;蛋白質(zhì)水平P0.001),E-cadherin的表達顯著下降(t=4.284,P=0.013);轉染IMD質(zhì)粒后Col I的表達較Ang Ⅱ組明顯下降(m RNA水平t=3.032,P=0.039;蛋白質(zhì)水平P0.001),E-cadherin的表達明顯上調(diào)(t=6.054,P=0.004);而轉染空質(zhì)粒后Col I、E-cadherin的表達與Ang Ⅱ無明顯差別(Col I m RNA水平t=0.951,P=0.395;蛋白質(zhì)水平t=1.208,P=0.294;E-cadherin蛋白質(zhì)水平t=1.613,P=0.182)。與正常對照組相比,Ang Ⅱ組細胞上清液e NOS、c GMP的濃度顯著增加(e NOS t=20.718,P0.001;c GMP t=8.324,P=0.001);與Ang Ⅱ組相比,IMD質(zhì)粒+Ang Ⅱ組的濃度進一步增加(e NOS t=10.682,P0.001;c GMP t=18.974,P0.001);而轉染空質(zhì)粒組+Ang Ⅱ組e NOS及c GMP的濃度與Ang Ⅱ組無明顯差別(e NOS t=2.039,P=0.111;c GMP t=1.469,P=0.216)。結論:IMD對Ang Ⅱ誘導的腎小管上皮細胞纖維化有抑制作用,可能通過e NOS-c GMP途徑阻斷Ang Ⅱ的作用實現(xiàn)的。
【關鍵詞】：血管緊張素II 纖維化 Intermedin 內(nèi)皮型一氧化氮合酶 環(huán)磷酸鳥苷
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R692
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 主要縮略詞中英文對照9-10
• 前言10-12
• 1 材料與方法12-25
• 1.1 實驗材料12-15
• 1.2 研究方法15-24
• 1.3 統(tǒng)計學分析24-25
• 2 結果25-31
• 2.1 細胞培養(yǎng)25
• 2.2 轉染質(zhì)粒后熒光顯微鏡下觀察25-26
• 2.3 IMD轉染效率的檢測26
• 2.4 IMD對NRK-52E細胞Col I表達的影響26-27
• 2.5 IMD對NRK-52E細胞E-cadherin表達的影響27-28
• 2.6 IMD對各組NRK-52E細胞上清液eNOS、cGMP濃度的影響28-31
• 3 討論31-33
• 4 結論33-34
• 參考文獻34-37
• 綜述37-50
• 參考文獻44-50
• 致謝50-51
• 在學期間承擔/參與的科研課題與研究成果51-52
• 個人簡歷52

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本文編號：350480