目的:通過不同濃度的骨化三醇在不同時間點體外干預DU145及PC-3細胞,評價其對兩種前列腺癌細胞增殖及死亡效應的影響,進一步探討其作用機制。希望通過合理的聯(lián)合用藥,優(yōu)化骨化三醇的抗腫瘤效應。為臨床治療晚期前列腺癌提供新的思路和理論支持,促進臨床轉化。方法:選擇DU145及PC-3細胞。體外擴增至足夠數(shù)量。對兩種前列腺癌細胞實施不同濃度骨化三醇干預。在不同的時間點通過CCK-8檢測細胞增殖率,臺盼蘭染色計算細胞總死亡率,PI染色分析細胞周期分布,Annexin V流式細胞儀檢測早期凋亡。通過westernblot技術,分析兩種細胞凋亡和自噬信號通路的激活的狀況。進一步通過氯喹阻斷PC-3自噬信號通路,明確其是否有增敏骨化三醇的抗腫瘤效應。結果:骨化三醇體外干預72小時內(nèi),促進DU145細胞增殖,抑制凋亡,對自噬信號通路無明顯影響。骨化三醇抑制PC-3細胞增殖,促進自噬,對凋亡信號通路無明顯影響。骨化三醇聯(lián)合氯喹較單獨應用骨化三醇或氯喹能更好的抑制PC-3細胞的增殖,并促進其通過自噬上游激活同時自噬下游抑制來提高細胞死亡率。結論:骨化三醇通過促進增殖、抑制凋亡,促進DU145細胞進展。骨... 

【文章來源】：上海交通大學上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：106 頁

【學位級別】：博士

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緒論
第一部分 骨化三醇對DU145、PC-3 細胞生存及死亡的功能學研究
    1 主要實驗材料與設備
        1.1 實驗材料
        1.2 實驗設備
    2 實驗方法
        2.1 體外細胞培養(yǎng)、凍存、復蘇
        2.2 細胞增殖率檢測
        2.3 細胞死亡率檢測
        2.4 細胞周期檢測
        2.5 細胞早期凋亡檢測（Annexin V/PI）
        2.6 統(tǒng)計學方法
    3 實驗結果
        3.1 細胞形態(tài)學評估
        3.2 細胞增殖率檢測結果
        3.3 細胞死亡率檢測結果
        3.4 細胞周期檢測結果
        3.5 細胞早期凋亡檢測結果
    4 第一部分討論
第二部分 骨化三醇通過凋亡及自噬信號通路的調控影響細胞生存及死亡的機制研究
    1 主要實驗材料和設備
        1.1 實驗材料
        1.2 實驗設備
    2 實驗方法
        2.1 人前列腺癌標本免疫組化染色
        2.2 PC-3 細胞免疫熒光檢測
        2.3 凋亡及自噬信號通路分子檢測
        2.4 骨化三醇聯(lián)合氯喹通過自噬通路調節(jié)促進PC-3 細胞死亡的分子機制
        2.5 骨化三醇聯(lián)合氯喹干預對PC-3 細胞增殖及總死亡率的影響
        2.6 統(tǒng)計學方法
    3 實驗結果
        3.1 人體標本免疫組化染色結果
        3.2 PC-3 細胞免疫熒光檢測結果
        3.3 凋亡及自噬信號通路分子western檢測結果
        3.4 骨化三醇聯(lián)合氯喹作用后自噬通路分子western檢測結果
        3.5 骨化三醇聯(lián)合氯喹干預PC-3 細胞后增殖及總死亡率的檢測結果
    4 第二部分討論
全文小結
結論
參考文獻
致謝
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本文編號：3207964