發(fā)布時(shí)間：2021-05-26 13:43

　　目的探究miR-608在前列腺癌中的功能并揭示相關(guān)的作用機(jī)制。方法（1）采用miRNA加尾法qRT-PCR測(cè)定miR-608在前列腺癌細(xì)胞系DU145和PC3以及前列腺正常細(xì)胞系RWPE-1中的表達(dá)量。采用前列腺癌組織芯片miR-608顯色原位雜交的方法分析miR-608在前列腺癌組織和配對(duì)的癌旁組織中的表達(dá)情況。（2）采用BSP甲基化測(cè)序手段評(píng)估前列腺癌細(xì)胞中miR-608基因轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)處的 CpG島的甲基化狀態(tài)。進(jìn)一步,采用 5-氮雜-2’脫氧胞苷（5-aza-2’-deoxycytidine）DNA甲基化酶抑制劑處理前列腺癌細(xì)胞,并測(cè)定處理前后前列腺癌細(xì)胞系中miR-608的表達(dá)量。（3）Lipofectamine 2000用于在前列腺細(xì)胞系中轉(zhuǎn)染miR-608 mimic。采用CCK8法細(xì)胞活性測(cè)定、細(xì)胞集落形成實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞儀細(xì)胞周期測(cè)定、流式細(xì)胞儀細(xì)胞凋亡和活性caspase-3測(cè)定、細(xì)胞劃痕愈合實(shí)驗(yàn)和Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)研究miR-608在前列腺癌細(xì)胞系DU 145和PC3中的功能。另外,瘤內(nèi)注射miR-608/NC mimic的PC3細(xì)胞裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)被用... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：147 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
致謝
中文摘要
英文摘要
緒論
    參考文獻(xiàn)
第一章 MicroRNA-608在人前列癌細(xì)胞和組織中的表達(dá)情況及其調(diào)控機(jī)制
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    3 結(jié)果
        3.1 MiR-608在前列腺癌細(xì)胞系中呈現(xiàn)低表達(dá)
        3.2 前列腺癌組織芯片信息
        3.3 MiR-608在前列腺癌組織中呈現(xiàn)低表達(dá)
        3.4 MiR-608基因轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)處的CpG島甲基化狀態(tài)
        3.5 甲基化酶抑制劑提升miR-608在PC3細(xì)胞系中的表達(dá)量
    4 討論
    5 結(jié)論
    6 參考文獻(xiàn)
第二章 MicroRNA-608對(duì)人前列腺癌細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡和細(xì)胞遷移的影響
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    3 結(jié)果
        3.1 MiR-608脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染前列腺癌細(xì)胞系效率評(píng)估
        3.2 MiR-608過表達(dá)抑制前列腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)增殖
        3.3 MiR-608過表達(dá)誘發(fā)前列腺癌細(xì)胞G2/M周期阻滯
        3.4 MiR-608過表達(dá)抑制前列腺癌細(xì)胞遷移
        3.5 MiR-608過表達(dá)誘發(fā)前列腺癌細(xì)胞凋亡
        3.6 MiR-608抑制PC3細(xì)胞裸鼠皮下成瘤
    4 討論
    5 結(jié)論
    6 參考文獻(xiàn)
第三章 MicroRNA-608在人前列腺癌中的作用靶點(diǎn)及其調(diào)控前列腺癌的相關(guān)機(jī)制
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    3 結(jié)果
        3.1 MiR-608靶基因作用位點(diǎn)數(shù)據(jù)庫預(yù)測(cè)
        3.2 MiR-608過表達(dá)下調(diào)前列腺癌細(xì)胞中RAC2、PAK4、BCL2L1及其下游蛋白的表達(dá)
        3.3 RAC2和BCL2L1是miR-608的直接作用靶點(diǎn)
        3.4 敲低RAC2和BCL2L1可以重現(xiàn)過表達(dá)miR-608在前列腺癌細(xì)胞中的作用
        3.5 RAC2和BCL2L1在前列腺癌組織中呈現(xiàn)高表達(dá)
        3.6 RAC2/BCL2L1拯救實(shí)驗(yàn)
        3.7 MiR-608靶向PAK4的編碼區(qū)
        3.8 敲低PAK4可以重現(xiàn)過表達(dá)miR-608在前列腺癌細(xì)胞中的作用
        3.9 PAK4拯救實(shí)驗(yàn)
    4 討論
    5 結(jié)論
    6 參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)歷及在讀期間取得的科研成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]miRNA的生物合成過程[J]. 李偉,金由辛.  生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 2005(08)



本文編號(hào)：3206469