第一部分草酸鈣激活腎小管上皮細胞NADPH氧化酶介導的氧化應激對成石相關蛋白表達的作用研究【目的】探究NADPH氧化酶及細胞氧化應激在草酸鈣誘導的腎小管上皮細胞成石相關蛋白表達中的作用及機制【方法】采用草酸鈣晶體處理NRK-52E細胞,流式細胞術檢測細胞內活性氧（ROS）含量（DCFH-DA探針）,檢測細胞SOD、CAT、MDA含量及培養(yǎng)上清8-OHd G含量,共聚焦顯微鏡觀察細胞內Ca2+信號強度,real-time PCR檢測細胞AT1R表達,western blot檢測細胞AT1R、NAPDH氧化酶亞基（nox2和nox4）、NF-κB通路亞基（p50和p65）和成石相關蛋白（OPN、CD44和MCP-1）表達;同時,采用NADPH氧化酶抑制劑apocynin處理細胞,觀察其對上述指標的變化影響。采用腹腔注射乙醛酸法構建高草酸尿腎結石大鼠模型,Elisa法檢測大鼠血清Ang Ⅱ濃度,western blot及免疫組化染色檢測大鼠腎臟組織內AT1R表達�！窘Y果】草酸鈣處理誘導NRK-52E細胞內ROS產生增加,細胞SOD和CAT活性降低,而MDA及8-OHd G含量升高。weste... 

【文章來源】：華中科技大學湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數】：128 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

-1不同濃度AngII處理對NRK-52E細胞ROS產生的影響

濃度無明顯影響。本研究采取1 nM Ang II作為生理濃度Ang II，后續(xù)試驗采取含 1 nM Ang II 培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞以模擬細胞生理狀態(tài)。圖1-1-2 不同濃度Ang II處理對NRK-52E細胞內Ca2+濃度的影響。采用不同濃度AngII（0 nM、0.1 nM、1 nM、10 nM、100 nM、1000 nM）處理NRK-52E細胞6h，流式細胞術（Fluo-3AM探針）檢測各組細胞內Ca2+濃度。當Ang II濃度達到10 nM時，細胞內Ca2+濃度明顯升高，且Ca2+濃度隨著Ang II濃度增加而升高；Ang II≤1 nM對細胞內Ca2+濃度無明顯影響。*表示與對照組相比 < 0.05。2. 不同 CaOx 處理對 NRK-52E 細胞 ROS 產生的影響采用不同濃度（0 mM、0.1 mM、0.5 mM、1 mM、5 mM、10 mM）或不同時間（0 h、3 h、6 h、12 h、24 h、48 h）CaOx 處理 NRK-52E 細胞，流式細胞術（DCFH-

NRK-52E細胞內ROS含量與對照組相比明顯升高，差異具有顯著性（P<0.05）。本研究后續(xù)試驗采取含 1 mM CaOx 處理 NRK-52E 細胞 6h。圖1-2 不同濃度或不同時間CaOx處理對NRK-52E細胞ROS產生的影響。(a)采用不同濃度CaOx（0 mM、0.1 mM、0.5 mM、1 mM、5 mM、10 mM）處理NRK-52E細胞6h，流式細胞術檢測各組細胞內ROS含量。(b)采用1 mM CaOx處理NRK-52E細胞不同時間（0 h、3 h、6 h、12 h、24 h、48 h），流式細胞術檢測各組細胞內ROS含量。結果顯示，當CaOx濃度達到1 mM時，NRK-52E細胞內ROS含量明顯升高，且呈濃度依賴性；當CaOx處理時間達到6h時，NRK-52E細胞內ROS含量明顯升高，且呈時間依賴性。*表示與對照組相比 < 0.05。3. CaOx 處理對 NRK-52E 細胞氧化還原系統的影響3.1. CaOx 處理對 NRK-52E 細胞 ROS 產生的影響NADPH 氧化酶是細胞內 ROS 的重要來源之一


本文編號：3139590