目的:膀胱癌是危害人類生命和健康的常見惡性腫瘤,目前膀胱癌的治療主要是依據(jù)病理分期,以手術(shù)為主,輔以化學治療,存在著高費用、高復發(fā)的缺點。為此,有關(guān)膀胱癌的研究越來越集中于靶向藥物的研發(fā),其中抗腫瘤血管生成是靶向藥物研發(fā)的重要領(lǐng)域。通過文獻調(diào)研以及生信分析,我們發(fā)現(xiàn)YB-1與膀胱癌患者的預后相關(guān);YB-1可以抑制miR-29b-3p的成熟;miR-29b-3p的靶基因包括VEGFA。提出如下假說“YB-1通過抑制miR-29b-3p的成熟促進VEGFA的表達從而介導膀胱癌的血管生成”。本實驗擬通過闡釋YB-1與膀胱癌血管生成的內(nèi)在機制,為膀胱癌的治療提供新的靶點和研究方向。方法:Western Blot檢測EJ、UMUC3、RT4、SW780 4種膀胱癌細胞系中YB-1的表達,在高表達YB-1的EJ、UMUC3細胞系中用RNA干擾技術(shù)敲減YB-1,并用EJ細胞建立對照穩(wěn)轉(zhuǎn)株和YB-1敲減穩(wěn)轉(zhuǎn)株。通過qRT-PCR、Western blot檢測其下游基因VEGFA、miR-29b-3p的表達;用RNA干擾技術(shù)在YB-1敲減穩(wěn)轉(zhuǎn)株中敲減miR-29b-3p,qRT-PCR、Western ... 

【文章來源】：蘭州大學甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略詞表
第一章 緒論
    1.1 膀胱癌概述
    1.2 血管生成與膀胱癌的關(guān)系
    1.3 以YB-1為靶點是研究膀胱癌血管生成的新途徑
        1.3.1 YB-1的功能與作用機制
        1.3.2 YB-1與膀胱癌的關(guān)系
        1.3.3 YB-1與VEGFA的關(guān)系
    1.4 本課題的研究目的及內(nèi)容
第二章 實驗材料和方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細胞株及實驗動物
        2.1.2 主要實驗試劑
        2.1.3 實驗中主要設(shè)備
        2.1.4 主要溶液配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 細胞復蘇
        2.2.2 細胞培養(yǎng)及細胞傳代
        2.2.3 細胞凍存
        2.2.4 siRNA干擾
        2.2.5 shNRA干擾
        2.2.6 穩(wěn)轉(zhuǎn)株的建立
        2.2.7 CCK-8法檢測YB-1對EJ細胞增值的影響
        2.2.8 單克隆形成實驗
        2.2.9 血管生成實驗
        2.2.10 裸鼠成瘤在動物水平研究YB-1對膀胱癌血管生成的影響
        2.2.11 人膀胱癌標本收集及檢測分析
        2.2.12 細胞總RNA的提取
        2.2.13 反轉(zhuǎn)錄cDNA的合成
        2.2.14 qRT-PCR檢測YB-1、VEGFA、miR-29b-3p的表達
        2.2.15 統(tǒng)計學分析
        2.2.16 Western blot相關(guān)檢測
第三章 實驗結(jié)果
    3.1 人膀胱癌細胞系中YB-1的表達情況
    3.2 在EJ、UMUC3細胞系中敲減YB-1的表達
        3.2.1 以shRNA轉(zhuǎn)染EJ細胞并篩選EJ細胞的YB-1敲減穩(wěn)轉(zhuǎn)株（YB-1KD-EJ）和對照穩(wěn)轉(zhuǎn)株（CTRL-EJ）
        3.2.2 以siRNA轉(zhuǎn)染UMUC3細胞
    3.3 在EJ、UMUC3細胞系中敲減YB-1后VEGFA表達降低,miR-29b-3p升高
        3.3.1 在EJ細胞系中敲減YB-1后VEGFA表達降低,miR-29b-3p升高
        3.3.2 在UMUC3細胞系中敲減YB-1后,VEGFA顯著降低,而miR-29b-3p顯著升高
    3.4 在YB-1KD細胞系中敲減miR-29b-3p的表達可以逆轉(zhuǎn)VEGFA的表達
        3.4.1 qRT-PCR檢測示在YB-1KD細胞株中敲減miR-29b-3p的表達可以逆轉(zhuǎn)VEGFA的表達
        3.4.2 WB檢測示在YB-1KD-EJ細胞株中敲減miR-29b-3p的表達可以逆轉(zhuǎn)VEGFA的表達
    3.5 在EJ細胞系中敲減YB-1后細胞表型的變化
        3.5.1 EJ細胞系敲減YB-1后增值能力未見明顯變化
        3.5.2 EJ細胞系敲減YB-1后克隆形成能力未見明顯變化
        3.5.3 EJ細胞系敲減YB-1后誘導血管形成的能力減弱
    3.6 裸鼠皮下成瘤實驗
        3.6.1 EJ細胞系敲減YB-1后裸鼠腫瘤模型的生長速度減慢
        3.6.2 EJ細胞系敲減YB-1后裸鼠腫瘤中的血管生成明顯減少
    3.7 人膀胱癌標本中YB-1與VEGFA關(guān)系
第四章 討論
    4.1 YB-1在膀胱癌細胞系中的表達情況
    4.2 YB-1對miR-29b-3p表達的調(diào)控
    4.3 miR-29b-3p與惡性腫瘤的關(guān)系
    4.4 YB-1調(diào)控VEGFA表達的機制
    4.5 YB-1對膀胱癌細胞增值的影響
    4.6 YB-1對膀胱癌中血管生成的影響
    4.7 YB-1作為膀胱癌治療靶點的前景
第五章 結(jié)論
參考文獻
附錄
    7.1 細胞的蛋白提取
    7.2 BCA法測定目的蛋白濃度
    7.3 WB法檢測蛋白的表達
在學期間的研究成果
致謝



本文編號：3038604