京尼平交聯(lián)去細胞支架誘導大鼠缺損腎臟的再生
發(fā)布時間：2021-02-17 02:20
【目的】腎臟的再生能力幾乎為零。有學者嘗試用去細胞腎臟生物支架來誘導缺損腎臟的再生,已取得一定進展。但單純?nèi)ゼ毎镏Ъ苡幸姿荨⒆冃�、降解快等不足之處。腎支架植入到部分腎切除大鼠體內(nèi)后,支架組織降解過快,不能為組織或細胞的遷移再生提供良好的生長環(huán)境。要解決這一問題,通常需要通過交聯(lián)劑來改善支架的性能,本研究擬通過京尼平交聯(lián)法提高去細胞腎臟生物支架的性能,以利于組織和細胞的再生,能夠為缺損腎臟的再生和修復提供更好的條件�！痉椒ā縎D大鼠90只,體重230g左右,完全隨機分為正常組、未交聯(lián)支架組和京尼平交聯(lián)支架組。從大鼠體內(nèi)結扎血管,分離腎臟,PBS經(jīng)腹主動脈灌注去血后作為正常組;將離體腎臟依次灌注肝素溶液、1%TritonX-100、1%十二烷基硫酸鈉（SDS）、去離子水,得到去細胞以后的腎臟生物支架,作為未交聯(lián)支架組;而將制備好的去細胞生物支架浸泡在0.5%的京尼平溶液中37℃恒溫箱中行化學交聯(lián)12h得到京尼平交聯(lián)支架組。分別用HE、Masson、免疫熒光染色觀察三組腎臟的組織形態(tài)學特征;血管鑄型觀察三組腎臟內(nèi)部脈管結構,分析支架組腎臟脈管結構的保留情況;Ⅰ型膠原酶促降解實驗檢測三組...
【文章來源】：南華大學湖南省
【文章頁數(shù)】：78 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
各組SD大鼠腎臟大體觀
南華大學碩士學位論文16圖2各組SD大鼠腎臟HE與Masson染色（10×20)，黑色箭頭所指為腎小球輪廓Fig2HEandMassonstainingofSDratkidney（10×20),theblackarrowpointingtheglomerularoutline腎臟細胞外基質主要成分包括Ⅰ型膠原、Ⅳ型膠原、層粘連蛋白和纖維連接蛋白等，多種膠原纖維交織成網(wǎng)組成細胞外基質結構[35]。為了觀察去細胞后腎支架中的細胞外基質保留情況，組織免疫熒光染色結果顯示（圖3），紅色熒光標記為腎臟組織中Ⅰ型膠原的特異性染色，綠色熒光標記為Ⅳ型膠原的特異性抗體，藍色為藍染的細胞核。結果顯示與正常組相比，各支架組均可見明顯的Ⅰ型和Ⅳ型膠原纖維熒光染色，且經(jīng)京尼平交聯(lián)后的腎臟生物支架熒光染色更強，腎小球處尤為明顯。除正常腎臟組以外，各支架組均未見藍染的細胞核（圖3），這一結果與上述HE及Masson染色結果一致，即正常腎臟經(jīng)去細胞后能將腎臟組織中細胞核成分去除，細胞外基質成分沒有受到明顯的破壞，且經(jīng)京尼平交聯(lián)不會損壞支架中的結構。
第3章實驗結果17圖3各組SD大鼠腎臟膠原熒光染色（10×10），白色箭頭所指為腎小球輪廓Fig3FluorescencestainingofkidneycollagenofSDratsineachgroup(10×10),thewhitearrowpointingtheglomerularoutline此外，為了檢測去細胞過程對腎臟內(nèi)部血管結構的損傷情況，我們對三組大鼠腎臟進行血管鑄型。鑄型結果（圖4）顯示，與正常腎臟相比，去細胞腎臟生物支架和京尼平交聯(lián)支架中的血管脈絡得到了很好的保留。即盡管大鼠腎臟中細胞核成分被去除，但仍保留完整的細胞外基質成分及脈管結構，這一結構的保留將有助于促進支架植入缺損腎臟后的再生。圖4各組SD大鼠腎臟血管鑄型Fig4RenalvascularcorrosioncastingofSDratsineachgroup
【參考文獻】：
期刊論文
[1]京尼平交聯(lián)大鼠腎去細胞生物支架提高支架生物學性能的實驗研究[J]. 劉丹,杜奧玲,王新旺,張德明,唐匯李,王宇航,陳勝華. 中國臨床解剖學雜志. 2019(01)
[2]Immobilization of heparin on decellularized kidney scaffold to construct microenvironment for antithrombosis and inducing reendothelialization[J]. Miao Wang,Lili Bao,Xinyu Qiu,Xiaoshan Yang,Siying Liu,Yuting Su,Lulu Wang,Bo Liu,Qing He,Shiyu Liu,Yan Jin. Science China（Life Sciences）. 2018(10)
[3]京尼平對ob/ob小鼠肝部分切除術后肝再生的影響[J]. 畢楊輝,崔曉萌,於海天,周子琪,尚宏偉,王穩(wěn),路欣,丁嬌嬌,江瑛. 中國比較醫(yī)學雜志. 2018(08)
[4]腎臟細胞外基質代謝的調控[J]. 程虹,諶貽璞. 國外醫(yī)學(內(nèi)科學分冊). 2003(11)
碩士論文
[1]京尼平苷的酶解工藝及其產(chǎn)物的降糖活性研究[D]. 鄭禮勝.中南大學 2010
本文編號：3037272
【文章來源】：南華大學湖南省
【文章頁數(shù)】：78 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
各組SD大鼠腎臟大體觀
南華大學碩士學位論文16圖2各組SD大鼠腎臟HE與Masson染色（10×20)，黑色箭頭所指為腎小球輪廓Fig2HEandMassonstainingofSDratkidney（10×20),theblackarrowpointingtheglomerularoutline腎臟細胞外基質主要成分包括Ⅰ型膠原、Ⅳ型膠原、層粘連蛋白和纖維連接蛋白等，多種膠原纖維交織成網(wǎng)組成細胞外基質結構[35]。為了觀察去細胞后腎支架中的細胞外基質保留情況，組織免疫熒光染色結果顯示（圖3），紅色熒光標記為腎臟組織中Ⅰ型膠原的特異性染色，綠色熒光標記為Ⅳ型膠原的特異性抗體，藍色為藍染的細胞核。結果顯示與正常組相比，各支架組均可見明顯的Ⅰ型和Ⅳ型膠原纖維熒光染色，且經(jīng)京尼平交聯(lián)后的腎臟生物支架熒光染色更強，腎小球處尤為明顯。除正常腎臟組以外，各支架組均未見藍染的細胞核（圖3），這一結果與上述HE及Masson染色結果一致，即正常腎臟經(jīng)去細胞后能將腎臟組織中細胞核成分去除，細胞外基質成分沒有受到明顯的破壞，且經(jīng)京尼平交聯(lián)不會損壞支架中的結構。
第3章實驗結果17圖3各組SD大鼠腎臟膠原熒光染色（10×10），白色箭頭所指為腎小球輪廓Fig3FluorescencestainingofkidneycollagenofSDratsineachgroup(10×10),thewhitearrowpointingtheglomerularoutline此外，為了檢測去細胞過程對腎臟內(nèi)部血管結構的損傷情況，我們對三組大鼠腎臟進行血管鑄型。鑄型結果（圖4）顯示，與正常腎臟相比，去細胞腎臟生物支架和京尼平交聯(lián)支架中的血管脈絡得到了很好的保留。即盡管大鼠腎臟中細胞核成分被去除，但仍保留完整的細胞外基質成分及脈管結構，這一結構的保留將有助于促進支架植入缺損腎臟后的再生。圖4各組SD大鼠腎臟血管鑄型Fig4RenalvascularcorrosioncastingofSDratsineachgroup
【參考文獻】：
期刊論文
[1]京尼平交聯(lián)大鼠腎去細胞生物支架提高支架生物學性能的實驗研究[J]. 劉丹,杜奧玲,王新旺,張德明,唐匯李,王宇航,陳勝華. 中國臨床解剖學雜志. 2019(01)
[2]Immobilization of heparin on decellularized kidney scaffold to construct microenvironment for antithrombosis and inducing reendothelialization[J]. Miao Wang,Lili Bao,Xinyu Qiu,Xiaoshan Yang,Siying Liu,Yuting Su,Lulu Wang,Bo Liu,Qing He,Shiyu Liu,Yan Jin. Science China（Life Sciences）. 2018(10)
[3]京尼平對ob/ob小鼠肝部分切除術后肝再生的影響[J]. 畢楊輝,崔曉萌,於海天,周子琪,尚宏偉,王穩(wěn),路欣,丁嬌嬌,江瑛. 中國比較醫(yī)學雜志. 2018(08)
[4]腎臟細胞外基質代謝的調控[J]. 程虹,諶貽璞. 國外醫(yī)學(內(nèi)科學分冊). 2003(11)
碩士論文
[1]京尼平苷的酶解工藝及其產(chǎn)物的降糖活性研究[D]. 鄭禮勝.中南大學 2010
本文編號：3037272
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