目的:mTOR途徑是治療癌癥的關(guān)鍵靶標(biāo),mTOR抑制劑依維莫司（RAD001）已獲批準(zhǔn)用于治療腎細(xì)胞癌（RCC）。然而,RAD001的療效卻常常受到各種因素的限制,自噬就是其中一個(gè)重要的因素。RAD001能夠激活細(xì)胞產(chǎn)生自噬,而自噬又間接影響著細(xì)胞的增殖和凋亡。本研究的目的是通過探討有關(guān)ERK通路的細(xì)胞保護(hù)性自噬的變化,以研究RCC細(xì)胞對(duì)RAD001耐藥的潛在機(jī)制。方法和結(jié)果:用不同濃度的RAD001（0、0.001、0.01、0.1、1、10、20μmol/l）處理786-0和A498兩種細(xì)胞,共同培養(yǎng)不同的時(shí)間（0、1、2、4、8h）,并通過WB檢測(cè)自噬標(biāo)志物,發(fā)現(xiàn)RAD001能夠誘導(dǎo)RCC細(xì)胞產(chǎn)生自噬,并且遵循劑量和時(shí)間依賴性。應(yīng)用自噬抑制劑CQ處理RCC細(xì)胞,通過MTT測(cè)定和WB證實(shí),CQ能夠有效地增強(qiáng)了RAD001誘導(dǎo)的凋亡,并且證明RAD001誘導(dǎo)的自噬具有細(xì)胞保護(hù)作用。此外,正如MTT測(cè)定,流式細(xì)胞學(xué)和WB所顯示的,RAD001是通過有效激活ERK通路,不是通過激活JNK通路和p38通路而發(fā)揮作用。應(yīng)用ERK抑制劑司美替尼（AZD6244）來抑制ERK通路,它能有效地促進(jìn)... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：39 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．自抑制自噬能夠增強(qiáng)Ｒ?

最終誘導(dǎo)自噬。我們通過實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究ＲＡＤ００１介導(dǎo)ＥＲＫ活化并產(chǎn)生自??噬的機(jī)制。在７８６－０和Ａ４９８兩種細(xì)胞系中，用ＲＡＤ００１處理ＲＣＣ細(xì)胞１小時(shí)，??我們發(fā)現(xiàn)ＥＲＫ通路的下游因子Ｂｅｃｌｉｎ－１和ｐ－Ｂｃｌ－２表達(dá)上調(diào)（圖４Ａ和Ｂ）。此外，??聯(lián)合應(yīng)用ＡＺＤ６２４４和ＲＡＤ００１能夠顯著降低Ｂｅｃｌｉｎ－１和ｐ－Ｂｃｌ－２的表達(dá)水平（圖??４Ｃ和Ｄ）。這些結(jié)果表明，ＲＡＤ００１能夠誘導(dǎo)ＥＲＫ信號(hào)激活，ＥＲＫ分子傳導(dǎo)途徑??是通過上調(diào)Ｂｅｃｌｉｎ－１和ｐ－Ｂｃｌ－２的表達(dá)水平，最終激活自噬。??Ａ?７８６－０?Ａ４９８??ＲＡＤ?（２＿〇ｉ／Ｌ）?Ｏｈ?１ｈ?２ｈ?４ｈ?８ｈ?Ｏｈ?１ｈ?２ｈ?４ｈ?８ｈ??Ｂｅｃｌｉｎ－１?—?■?＿?——麵》?＿＿＿??ｐ－Ｂｄ－２??Ｂｃｌ－２?■丨■?■?－■麵?ｉ??ｐ－ａｃｔｉｎ?？?■?＿?■?？?■?１?■麵■?，?■?一?—１?——－??巳??？Ａ?１ＳＴ?７＆６＿０?Ｏｈ?，?＾?Ａ４９８?Ｏｈ??＊１?ａ?ｉｈ?荖?１?■?ｉｈ??孟?＊?■?２ｈ?Ｓ?＊?■?２ｈ?▲??�。�?ｉ??１。上―屋—■』二摩—Ｉ?１醒■?？＂麗??Ｃ?７８６－０?Ａ４９８??—?—?■＋■?■＋？??ＲＡＤ?－＋－＋?－＋－＋??Ｂｅｃｌｉｎ－１?—?ｍｍ?

?重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文???２．４?ＥＲＫ通路通過上調(diào)ＢｅｃＵｎ－１和ｐ－Ｂｃｌ－２的表達(dá)來介導(dǎo)自噬??ＥＲＫ通路能介導(dǎo)Ｂｃｌ－２的磷酸化，導(dǎo)致Ｂｃｌ－２／Ｂｅｃｌｉｎ－ｌ復(fù)合物的解離，Ｂｅｃｌｉｎ－１??是自噬啟動(dòng)的關(guān)鍵蛋白［２１］。隨著Ｂｃｌ－２／Ｂｅｃｌｉｎ－ｌ復(fù)合物的解離，Ｂｅｃｌｉｎ－１含量逐增高，最終誘導(dǎo)自噬。我們通過實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究ＲＡＤ００１介導(dǎo)ＥＲＫ活化并產(chǎn)生自??噬的機(jī)制。在７８６－０和Ａ４９８兩種細(xì)胞系中，用ＲＡＤ００１處理ＲＣＣ細(xì)胞１小時(shí)，??我們發(fā)現(xiàn)ＥＲＫ通路的下游因子Ｂｅｃｌｉｎ－１和ｐ－Ｂｃｌ－２表達(dá)上調(diào)（圖４Ａ和Ｂ）。此外，??聯(lián)合應(yīng)用ＡＺＤ６２４４和ＲＡＤ００１能夠顯著降低Ｂｅｃｌｉｎ－１和ｐ－Ｂｃｌ－２的表達(dá)水平（圖??４Ｃ和Ｄ）。這些結(jié)果表明，ＲＡＤ００１能夠誘導(dǎo)ＥＲＫ信號(hào)激活，ＥＲＫ分子傳導(dǎo)途是通過上調(diào)Ｂｅｃｌｉｎ－１和ｐ－Ｂｃｌ－２的表達(dá)水平，最終激活自噬。??Ａ－Ａ４９８??


本文編號(hào)：2963322