擠壓綜合征相關(guān)急性腎損傷大鼠Th17/Treg細(xì)胞失衡及烏司他丁干預(yù)作用研究
發(fā)布時(shí)間：2020-12-17 00:56
目的:基于課題組前期的工作,建立擠壓綜合征相關(guān)急性腎損傷大鼠模型,驗(yàn)證烏司他丁對擠壓綜合征相關(guān)急性腎損傷大鼠體內(nèi)Th17/Treg細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用,旨在為擠壓綜合征相關(guān)急性腎損傷的致病機(jī)制提供新的思路,為其干預(yù)治療尋找新的靶點(diǎn)。方法:將46只雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為5組:正常對照組（n=6）,CSAKI模型組（n=10）,CSAKI+UTI1組（50,000U/kg）（n=10）,CSAKI+UTI2組（100,000U/kg）（n=10）和CSAKI+UTI3（200,000U/kg）（n=10）。CSAKI模型組和CSAKI+UTI組動(dòng)物稱重后用2%戊巴比妥鈉（3mL/kg）腹腔注射麻醉,然后置于俯臥位,用我們自主研發(fā)的新一代數(shù)字?jǐn)D壓平臺（精確設(shè)定擠壓重量）建立擠壓綜合征相關(guān)急性腎損傷大鼠模型,雙下肢擠壓24小時(shí),壓力是大鼠體重的10倍。當(dāng)達(dá)到指定的壓力和時(shí)間后,在CSAKI+UTI1,UTI2,UTI3組大鼠中分別通過尾靜脈給予50,000U/kg,100,000U/kg和200,000U/kg烏司他丁。觀察24小時(shí)后,將CSAKI模型組、UTI治療組和正常對照組大鼠分別麻醉后...
【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校
【文章頁數(shù)】：44 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
血生化指標(biāo)變化
圖 2 肌肉和腎組織的蘇木精和伊紅染色的代表性圖像注：HE 染色（×200）結(jié)果（標(biāo)尺為 100μm） 正常對照組（A,F），CSAKI 組（B,G），CSAKI+UTI1 組（C,H）,CSAKI+UTI3 組（D,I）,CSAKI+UTI3 組（E,J）。1.2.3 細(xì)胞因子 IL-17，IL-6，IL-10 和 TGF-β1 水平的變化為了進(jìn)一步了解炎性生物標(biāo)志物的變化，收集血清樣品并如上所述通過 ELISA重復(fù)測定三次。各組中 Th17 和 Treg 細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)水平如圖 3 所示。與正常對照組相比，CSAKI 組 Th17 細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子（IL-6 和 IL-17）的水平顯著高于正常對照組。（圖 3A，B; P <0.01），這兩種細(xì)胞因子都參與促進(jìn)炎癥的發(fā)生發(fā)展。而用烏司他丁治療后可降低 CSAKI 組大鼠體內(nèi) IL-6 和 IL-17 的水平（P <0.05）。 IL-10 和 TGF-β1 是 Treg 相關(guān)的細(xì)胞因子，其特征在于免疫抑制。與正常對照組相比，CSAKI 組大鼠體內(nèi) IL-10 水平顯著升高（圖 3C; P <0.01），而 TGF-β1 水平顯著降低（圖 3D; P <0.01）。用烏司他丁治療后（100,000U/kg和 200,000U/kg）的 CSAKI 大鼠體內(nèi) TGF-β1 的血清濃度顯著增加，但血清 IL-10水平并沒有顯著變化。此外，在腎組織中，Th17 相關(guān)細(xì)胞因子（IL-6 和 IL-17）
圖 3 血清和腎組織中 IL-6，IL-17，IL-10 和 TGF-β1 的水平變化注：A 血清 IL-6 水平; B 血清 IL-17 水平; C 血清 IL-10 水平; D 血清 TGF-β1 水平; E 腎組織中 IL-6 水平; F 腎組織中 IL-17 水平; G 腎組織中的 IL-10 水平; H 腎組織中的 TGF-β1 水平。與對照組相比，＆P <0.05; &&P <0.01。與 CSAKI 組相比* P <0.05; **P <0.01。1.2.4 流式細(xì)胞術(shù)分析 Treg 細(xì)胞和 Th17 細(xì)胞的比例為了評估烏司他丁對 CD4+T 細(xì)胞的影響，收集外周血樣品用于流式細(xì)胞分析。如圖 4 所示，門控 CD4+T 細(xì)胞（圖 4M）。對于 Th17 細(xì)胞分析，與正常對照組相比，CSAKI 組大鼠外周血中 Th17 細(xì)胞的百分比顯著增加（P <0.01）。與 CSAKI組大鼠相比，用烏司他丁治療后 Th17 細(xì)胞百分比顯著降低（P <0.01）（圖 4A-E，K）。與正常對照組相比，CSAKI 組大鼠外周血中 Treg 細(xì)胞的比例顯著降低（P<0.05）。與 CSAKI 組相比，烏司他丁治療組的 CD4+T 細(xì)胞表現(xiàn)出顯著的 Treg細(xì)胞百分比增加（圖 4F-J，L）。
本文編號：2921110
【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校
【文章頁數(shù)】：44 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
血生化指標(biāo)變化
圖 2 肌肉和腎組織的蘇木精和伊紅染色的代表性圖像注：HE 染色（×200）結(jié)果（標(biāo)尺為 100μm） 正常對照組（A,F），CSAKI 組（B,G），CSAKI+UTI1 組（C,H）,CSAKI+UTI3 組（D,I）,CSAKI+UTI3 組（E,J）。1.2.3 細(xì)胞因子 IL-17，IL-6，IL-10 和 TGF-β1 水平的變化為了進(jìn)一步了解炎性生物標(biāo)志物的變化，收集血清樣品并如上所述通過 ELISA重復(fù)測定三次。各組中 Th17 和 Treg 細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)水平如圖 3 所示。與正常對照組相比，CSAKI 組 Th17 細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子（IL-6 和 IL-17）的水平顯著高于正常對照組。（圖 3A，B; P <0.01），這兩種細(xì)胞因子都參與促進(jìn)炎癥的發(fā)生發(fā)展。而用烏司他丁治療后可降低 CSAKI 組大鼠體內(nèi) IL-6 和 IL-17 的水平（P <0.05）。 IL-10 和 TGF-β1 是 Treg 相關(guān)的細(xì)胞因子，其特征在于免疫抑制。與正常對照組相比，CSAKI 組大鼠體內(nèi) IL-10 水平顯著升高（圖 3C; P <0.01），而 TGF-β1 水平顯著降低（圖 3D; P <0.01）。用烏司他丁治療后（100,000U/kg和 200,000U/kg）的 CSAKI 大鼠體內(nèi) TGF-β1 的血清濃度顯著增加，但血清 IL-10水平并沒有顯著變化。此外，在腎組織中，Th17 相關(guān)細(xì)胞因子（IL-6 和 IL-17）
圖 3 血清和腎組織中 IL-6，IL-17，IL-10 和 TGF-β1 的水平變化注：A 血清 IL-6 水平; B 血清 IL-17 水平; C 血清 IL-10 水平; D 血清 TGF-β1 水平; E 腎組織中 IL-6 水平; F 腎組織中 IL-17 水平; G 腎組織中的 IL-10 水平; H 腎組織中的 TGF-β1 水平。與對照組相比，＆P <0.05; &&P <0.01。與 CSAKI 組相比* P <0.05; **P <0.01。1.2.4 流式細(xì)胞術(shù)分析 Treg 細(xì)胞和 Th17 細(xì)胞的比例為了評估烏司他丁對 CD4+T 細(xì)胞的影響，收集外周血樣品用于流式細(xì)胞分析。如圖 4 所示，門控 CD4+T 細(xì)胞（圖 4M）。對于 Th17 細(xì)胞分析，與正常對照組相比，CSAKI 組大鼠外周血中 Th17 細(xì)胞的百分比顯著增加（P <0.01）。與 CSAKI組大鼠相比，用烏司他丁治療后 Th17 細(xì)胞百分比顯著降低（P <0.01）（圖 4A-E，K）。與正常對照組相比，CSAKI 組大鼠外周血中 Treg 細(xì)胞的比例顯著降低（P<0.05）。與 CSAKI 組相比，烏司他丁治療組的 CD4+T 細(xì)胞表現(xiàn)出顯著的 Treg細(xì)胞百分比增加（圖 4F-J，L）。
本文編號：2921110
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