本文關(guān)鍵詞：遷移侵襲抑制蛋白在腎癌中的表達及對腎癌細胞增殖、侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景:腎細胞癌(renal cell carcinoma,RCC)是腎實質(zhì)細胞發(fā)生的惡性腫瘤病變,其病理類型多樣,除80%-90%的透明細胞癌外還有腺癌、嫌色細胞癌等類型。近年調(diào)查顯示,國內(nèi)腎癌發(fā)病率約占全身惡性腫瘤2%-3%,在泌尿系統(tǒng)中的比率僅次于位居榜首的膀胱癌。相當數(shù)量以“血尿、疼痛、腫塊”三聯(lián)癥就診的患者已經(jīng)處于中晚期。腎癌因病理類型的特殊性使其對放化療敏感性差,目前臨床常規(guī)以外科手術(shù)作為主要治療方法,靶向藥物輔助治療,但對于術(shù)后腫瘤的復發(fā)、浸潤、轉(zhuǎn)移等進展事件無有效預防辦法,對于部分喪失手術(shù)機會的T3期病變以及T4期病變尚無有效治療手段。近年發(fā)現(xiàn)的遷移侵襲抑制蛋白(migration and invasion inhibitory protein,MIIP,亦稱IIP45)具有抑制腫瘤細胞增殖、浸潤轉(zhuǎn)移的能力。當其位于染色體1p36.22的編碼基因發(fā)生等位基因缺失或基因單倍劑量不足時,可誘發(fā)全身多系統(tǒng)惡性腫瘤,如前列腺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、結(jié)腸癌、乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌等。并且國外研究表明該基因是腫瘤細胞增殖、侵襲轉(zhuǎn)移等生物學行為相關(guān)信號通路的上游調(diào)控基因,增加MIIP表達可有效抑制腫瘤細胞的增殖、侵襲轉(zhuǎn)移。但到目前為止尚無腎癌的相關(guān)報道。目的:1.明確腎細胞癌組織及癌旁正常腎組織中miip蛋白的表達水平,并分析其表達水平與腎細胞癌的發(fā)生及臨床分期之間的關(guān)系。2.利用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù)制備過表達miip蛋白的腎癌786-0/miip細胞系,通過上調(diào)腎癌786-0細胞中miip表達量觀察其對細胞增殖、侵襲、遷移能力的影響。方法:1.不同病理組織中miip蛋白表達水平檢測采用免疫組織化學染色(sp)法對84對腎細胞癌患者手術(shù)標本(配對腎癌組織組、癌旁正常腎組織組)進行染色,在顯微鏡下觀察組織切片染色情況,運用半定量法分析腎細胞癌組織及癌旁正常腎組織中miip蛋白的表達情況,并通過統(tǒng)計學分析miip表達水平與腎癌的發(fā)生及臨床分期的關(guān)系。同時提取患者腎癌組織及癌旁正常腎組織蛋白,通過western-blot檢測腎細胞癌組織與癌旁正常腎組織中miip蛋白表達水平,并進行表達差異性分析。2.miip對腎癌細胞增殖、侵襲遷移能力的影響研究構(gòu)建攜帶miip基因的p-flag-cmv4質(zhì)粒,通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)轉(zhuǎn)染腎癌786-0細胞制備實驗組786-0/miip細胞系,p-flag-cmv4空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染786-0細胞制備對照組786-0/cmv4細胞系,未做轉(zhuǎn)染處理的786-0細胞系作為空白組。western-blot、real-timepcr技術(shù)檢測三組細胞miip蛋白和信使rna(messengerrna,mrna)的表達情況。通過細胞周期測定(流式細胞術(shù))、mtt實驗檢測各組細胞的增殖能力,transwell實驗、劃痕實驗檢測各組細胞的侵襲遷移能力。結(jié)果:1.不同病理組織中miip蛋白表達水平檢測運用sp法檢測發(fā)現(xiàn):腎細胞癌組織miip蛋白染色陽性比率為30.95%,癌旁正常腎組織miip蛋白染色陽性比率為85.71%(p0.05),其差異具有統(tǒng)計學意義。腎細胞癌不同臨床分期中MIIP蛋白染色陽性比率分別為Ⅰ期54.55%,Ⅱ期40.54%和Ⅲ期13.89%;根據(jù)統(tǒng)計分析:Ⅰ期和Ⅱ期比較P0.25,無統(tǒng)計學意義;Ⅰ期與Ⅲ期比較,P0.00625,具有統(tǒng)計學意義;Ⅱ期與Ⅲ期比較,P0.0125,具有統(tǒng)計學意義。Western-blot檢測結(jié)果分析:腎細胞癌組織中MIIP條帶灰度值較癌旁正常腎組織的灰度值低,經(jīng)t檢驗,P0.01。這與免疫組織SP法結(jié)果相符合。2.MIIP對腎癌細胞增殖、侵襲遷移能力的影響研究通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)轉(zhuǎn)染MIIP基因入786-0細胞后,利用Western-blot檢測結(jié)果顯示實驗組786-0/MIIP細胞的MIIP蛋白表達量比對照組786-0/CMV4及空白組786-0增高。Real-time PCR檢測結(jié)果顯示:實驗組MIIP mRNA相對表達量比對照組及空白組增高。流式細胞術(shù)檢測細胞周期顯示:實驗組786-0/MIIP細胞系增殖指數(shù)PI:53.69,小于空白組786-0細胞系(PI:56.33)(P0.05),說明上調(diào)MIIP表達后細胞周期受到阻滯。MTT實驗結(jié)果顯示:上調(diào)MIIP表達后細胞增殖能力減弱(P0.01)。Transwell實驗中實驗組786-0/MIIP細胞穿透小室數(shù)為(15.23±3.21),少于對照組(39.03±7.49)及空白組(40.17±4.24)(P0.01),說明上調(diào)MIIP表達后786-0細胞侵襲能力減弱。細胞劃痕實驗結(jié)果顯示上調(diào)MIIP表達后786-0細胞遷移能力弱于對照組及空白組(P0.01)。結(jié)論:MIIP蛋白在腎細胞癌組織及癌旁正常腎組織中均表達,前者比后者表達量降低。在腎細胞癌組織中MIIP的表達水平與腫瘤臨床分期密切相關(guān),Ⅲ期較Ⅰ期、Ⅱ期明顯減少。通過質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù)能夠制備過表達MIIP的腎癌細胞系。轉(zhuǎn)染成功的腎癌786-0/MIIP細胞系MIIP表達量增加,有效抑制了腎癌細胞的增殖、侵襲與遷移。
【關(guān)鍵詞】：MIIP 腎細胞癌 免疫組織化學 增殖 侵襲 遷移
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.11
【目錄】：

• 縮略語表4-7
• 中文摘要7-10
• ABSTRACT10-14
• 前言14-16
• 文獻回顧16-28
• 實驗一 MIIP在腎細胞癌及癌旁正常腎組織中的表達28-38
• 1 材料與試劑28-30
• 2 實驗方法30-31
• 3 結(jié)果31-35
• 4 討論35-38
• 實驗二 MIIP對腎癌細胞生物學行為影響的研究38-50
• 1 材料與試劑38-39
• 2 實驗方法39-42
• 3 結(jié)果42-47
• 4 討論47-50
• 小結(jié)50-51
• 參考文獻51-62
• 個人簡歷和研究成果62-63
• 致謝63

  本文關(guān)鍵詞：遷移侵襲抑制蛋白在腎癌中的表達及對腎癌細胞增殖、侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：286524