【摘要】：目的:檢測在前列腺癌中NOP16的表達水平,下調前列腺癌細胞內的NOP16水平后對前列腺癌細胞形態(tài)、總蛋白濃度以及體外生物學行為的影響;下調與NOP16體內結合的蛋白復合體后對NOP16功能的影響;進一步探討降低前列腺癌細胞中NOP16水平后對核糖體生物合成的影響并初步探討機制。方法:首先檢測NOP16分別在前列腺增生組織以及前列腺癌組織中以及細胞中表達水平是否存在差異,接著運用特異性siRNA敲低NOP16細胞內源性水平,并運用Western Blot、RT-qPCR驗證是否敲低成功;運用細胞計數(shù)、CCK-8實驗檢測降低前列腺癌PC3細胞中NOP16水平是否會對影響細胞增殖,運用細胞劃痕實驗檢測降低前列腺癌細胞中的NOP16水平表達是否會對細胞體外遷移產生影響,運用Transwell實驗檢測降低前列腺癌細胞中的NOP16水平表達是否會對細胞體外侵襲產生影響。運用數(shù)據(jù)庫檢索、質譜分析和免疫共沉淀尋找與NOP16相互結合的蛋白并使用RT-qPCR及Western-Blot方法驗證,運用特異性siRNA對前列腺癌PC3細胞系內NOP16及相結合蛋白基因分別和共同敲低,對比各組細胞體外行為學差異,最后運用RT-qPCR檢測各組細胞內18S和28SrRNA的差異。結果:前列腺癌組織中NOP16明顯高于前列腺增生組織;利用NOP16 siRNA對PC3細胞進行轉染降低細胞內源性NOP16的表達后,前列腺癌細胞體積變小,細胞總蛋白濃度降低,前列腺癌的細胞體外增殖、侵襲及遷移均得到抑制;聯(lián)合數(shù)據(jù)庫檢索、質譜分析和免疫共沉淀實驗篩選出可以在細胞內和NOP16相結合的蛋白hnRNPM,降低hnRNPM蛋白表達后,可以促進前列腺癌PC3細胞的體外侵襲和遷移,但不影響其增殖。運用特異性SiRNA對前列腺癌PC3細胞系內NOP16進行敲低后,細胞內18S和28SrRNA明顯減少。結論:前列腺癌細胞內NOP16低表達可使前列腺癌細胞體積大小、總蛋白濃度發(fā)生變化,同時前列腺癌細胞的體外生物學行為增殖、遷移、侵襲均會發(fā)生改變,并且細胞內核糖體大小亞基同時隨NOP16的變化發(fā)生變化;異常表達和NOP16在前列腺癌細胞內相結合的蛋白hnRNPM后,前列腺癌細胞的體外遷移和侵襲發(fā)生改變,但其增殖變化卻不明顯。因此我們認為,NOP16的表達可影響前列腺癌的發(fā)生發(fā)展,且能與hnRNPM互相結合,敲低NOP16后可影響hnRNPM在前列腺癌中的作用,而且其是通過核糖體的應激影響前列腺癌的發(fā)生進展。
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R737.25
【圖文】：

別從臨床上收集到的人前列腺增生組織和前列腺癌組織進行RNA提取和反轉錄及RT -qPCR實驗。實驗結果顯示，NOP16在前列腺癌組織中高表達于前列腺增生組織（詳見圖1）。圖 1 前列腺增生和 PCa 組織中 NOP16 的 mRNA 的表達差異2.2 NOP16在細胞水平時前列腺癌高于正常前列腺上皮除組織之間的對比，另外我們也通過細胞水平比較了人的正常前列腺上皮細胞系RWPE-1和人前列腺癌細胞系PC3中的NOP16的表達量。我們分別從上述兩種細胞系中提取總蛋白和RNA，并對提取的蛋白進行Western-Blot實驗檢測，提取的RNA反轉錄成cDNA后進行RT-qPCR實驗檢測。實驗結果顯示，和正常的人正常前列腺上皮細胞相比，NOP16的蛋白表達水平和mRNA水平在PC3細胞系中高表達（如圖2所示）。

提取的RNA反轉錄成cDNA后進行RT-qPCR實驗檢測。實驗結果顯示，和正常的人正常前列腺上皮細胞相比，NOP16的蛋白表達水平和mRNA水平在PC3細胞系中高表達（如圖2所示）。

我們分別將特異性NOP16敲低的siRNA轉染進PC3細胞中，比較siRNA組、對照組Control組的內源性NOP16的表達水平，結果顯示siRNA組的NOP16在蛋白和mRNA水平的表達量顯著降低（如圖3所示）。收集同步培養(yǎng)的細胞（siRNA組和Control組），且使用細胞計數(shù)器收集相同數(shù)目的細胞后對兩組細胞進行蛋白濃度測定，了解兩組細胞處理后各組的蛋白總濃度的差異。結果顯示，經過NOP16siRNA敲低后的細胞組的總蛋白濃度表達量明顯低于對照組的總蛋白濃度表達量，并且經過分析后顯示兩組差異具有統(tǒng)計學意義。（n=3，p＜0.05）值得一提的是，在光學顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，在siRNA處理組的細胞體積相對于對照的Control組變小，具有統(tǒng)計學意義（n=80,p<0.05）（如圖4所示）。圖 3 構建 NOP16 敲低前列腺癌 PC3 細胞

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1 馬建宏;曹開源;徐霖;鐘慧玲;張素粉;羅虹嬌;庹玖玲;張?zhí)?劉建中;;前列腺癌細胞轉移相關基因的篩選[J];熱帶醫(yī)學雜志;2015年11期

2 姚

本文編號：2788052