【摘要】：背景研究發(fā)現隨著終末期腎臟病(End-stage renal disease,ESRD)腹膜透析(Peritoneal dialysis,PD)患者PD時間的延長,腹膜的形態(tài)和功能將發(fā)生改變,導致腹膜纖維化(Peritoneal fibrosis,PF),最終導致超濾衰竭(Ultrafiltration Failure,UFF)。目前UFF已經成為PD患者被迫退出PD的主要原因,因此探討并尋找減輕腹膜纖維化、延緩腹膜透析UFF發(fā)生的方法顯得尤為重要。目的本研究通過白細胞介素6(Interleukin-6,IL-6)刺激人腹膜間皮細胞(Human peritoneal mesothelial cells,HPMCs),誘導HPMCs上皮-間質轉化(Epithelial mesenchymal transition,EMT),并探討信號傳導與轉錄激活基因3(Signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)對上皮-間質轉化的作用。方法體外培養(yǎng)人腹膜間皮細胞,用不同濃度IL-6刺激HPMCs不同時間,分組:(1)以50μg/L IL-6刺激HPMCs不同時間,按刺激時間0h、24h、48h、72 h分組;(2)不同濃度IL-6刺激HPMCs 24小時,按IL-6濃度0μg/L、50μg/L、100μg/L分組;應用慢病毒介導RNA干擾技術培養(yǎng)并建立穩(wěn)定沉默STAT3基因的HPMCs細胞株,并將其分組:(1)空白對照組;(2)IL-6組;(3)空載體組;(4)空載體+IL-6組;(5)慢病毒感染組;(6)慢病毒感染+IL-6組,其中所有加入IL-6組均以50μg/L IL-6刺激HPMCs 24小時。應用細胞免疫熒光觀察技術檢測EMT相關蛋白E-鈣黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)的表達和分布。應用蛋白印跡法(Western blot)及實時熒光定量PCR法(Quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)檢測JAK2(Janus kinase 2,JAK2)/STAT3信號轉導通路及EMT相關蛋白和基因表達。采用SPSS22.0軟件對實驗中所得數據進行統計學分析。結果與對照組相比,隨著IL-6刺激HPMCs時間延長及IL-6的濃度增加,E-cadherin蛋白和m RNA(Messenger ribonucleicacid,mRNA)表達均下降(均P0.05),α-SMA、VEGF(Vascular endothelial growth factor)蛋白和m RNA表達均升高(均P0.05),通路蛋白p-JAK2/JAK2比值和p-STAT3/STAT3比值均升高(P0.05)。應用慢病毒沉默STAT3基因后,與空載體+IL-6組相比,慢病毒感染+IL-6組α-SMA、VEGF蛋白表達均下降(均P0.05),E-cadherin蛋白表達上升(P0.05)。細胞免疫熒光結果提示,對照組間皮細胞之間可見E-cadherin蛋白的表達,胞質內可少量表達α-SMA蛋白;與對照組相比,50μg/L IL-6刺激HPMCs 24小時后,細胞膜上E-cadherin蛋白表達明顯減少,間皮細胞胞質內α-SMA蛋白表達增加。結論IL-6可以活化JAK2/STAT3信號通路參與人腹膜間皮細胞EMT過程,并可以刺激HPMC分泌VEGF。應用慢病毒沉默STAT3基因后,人腹膜間皮細胞EMT過程被抑制。
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R692
【圖文】：

綠色熒光代表檢測的目的蛋白，藍色熒光代表 HPMC 的細胞L-6 對 HPMC 中 α-SMA、E-cadherin 表達的影響（細胞免疫熒6 對 JAK2/STAT3 信號通路的影響tern 蛋白印記法結果顯示，隨著 IL-6 刺激人腹膜間皮細胞時間的增加，通路蛋白 p-JAK2 與 JAK2 的比值和 p-STAT3 與 STA與對照比較均 P＜0.05），證明通路蛋白磷酸化水平升高，見

a注：A：對照組；B、C：50、100μg/L IL-6 刺激人腹膜間皮細胞 24 h；與比較，aP＜0.05；n=3圖 3.1 不同劑量 IL-6 刺激對人腹膜間皮細胞 JAK2/STAT3 信號通路的影（Western 印跡）aaaa

VEGF 的蛋白和 mRNA 表達升高（與對照比較均 P＜0.05），見圖4.1，圖 4.2。注：A：Western 印跡；B：實時熒光定量 PCR ；A：對照組；B、C：50、100μg/LIL-6 刺激人腹膜間皮細胞 24 h；與對照組比較，aP＜0.05；n=3圖 4.1 不同劑量 IL-6 刺激 24 h 人腹膜間皮細胞 EMT 相關蛋白的表達aaaaaaaaaaaaAB

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本文編號：2777175