【摘要】：第一部分:TNAP在心臟、腎臟纖維化中表達上調目的:探討TNAP在心臟及腎臟纖維化中的表型變化。方法:采用結扎冠狀動脈前降支的方法構建大鼠心肌梗死(Myocardial infarction,MI)誘導的心臟纖維化模型;采用結扎左側輸尿管的方法構建小鼠單側輸尿管梗阻(Unilateral ureteral obstruction,UUO)誘導的腎臟纖維化模型。MI大鼠分別獲取心肌梗死后1天,3天,7天,14天,28天心肌組織,于液氮中保存。Western Blot檢測心肌TNAP及α-SMA表達。UUO小鼠10天后處死并獲取左側腎臟組織。Western Blot及免疫組化檢測腎臟組織TNAP表達。結果:①心梗后左室α-SMA及TNAP表達隨心梗時間有逐漸上調趨勢。在心肌梗死后14天,心肌α-SMA、TNAP表達達到高峰,心梗后28天反而下降;②與假手術組相比,UUO組TNAP表達顯著增高(p0.001)。結論:TNAP在心、腎纖維化中表達上調,提示TNAP可能參與心臟及腎臟纖維化過程。第二部分:抑制TNAP對心臟纖維化的影響目的:探討抑制TNAP對心臟纖維化的影響及可能機制。方法:大鼠隨機分為3組,每組8只:假手術組(Sham)、心肌梗死+鹽水注射組(MI+Saline)和心肌梗死+TNAP抑制劑組(MI+Tetra)。在心梗前28天,給予大鼠Tetra(11 mg·kg-1·day-1)或等體積生理鹽水腹腔注射,于心梗第14天處死。超聲心動圖檢測心功能和心臟病理改變。Western blot 方法測定 Collagen I,α-SMA,TGF-β1 和 TNAP 表達。免疫組織化學染色方法檢測心肌TNAP、α-SMA和TGF-β1表達。結果:TNAP在心梗后心臟中表達增高,其分布與心梗后膠原增生分布區(qū)域一致(P0.05)。TNAP抑制劑(Tetra)可顯著抑制心臟TNAP表達,降低心梗誘導的膠原沉積、TGF-β1及α-SMA表達,同時改善心梗后心臟重塑及心功能改變,包括FS,EF,LVIDs以及ⅣSs(P均0.05)。結論:抑制TNAP可能通過抑制肌成纖維細胞轉化及膠原合成的方式改善心肌纖維化,同時改善心梗誘導的心臟重塑及心功能變化。第三部分:抑制TNAP對腎臟纖維化和鈣化的影響目的探討抑制TNAP對單側輸尿管梗阻(UUO)小鼠腎臟纖維化和鈣化的影響。方法SPF級C57BL/6雄性小鼠24只,隨機分為3組,假手術組(n=8),UUO+生理鹽水組(n=8),UUO+Ins16 組(n=8)。UUO 模型建立后第10日處死小鼠,取術側腎組織。采用天狼星紅染色、Masson染色、茜素紅S染色分別檢測腎臟膠原沉積及鈣化程度。Western Blotting檢測腎臟TGF-β1,TNAP表達。免疫組織化學染色法檢測腎臟TNAP 表達。RT-PCR 檢測腎臟 TGF-β1、BMP2、Col1a1、Col2a1 mRNA表達。結果與假手術組相比,UUO+生理鹽水組腎臟膠原面積百分比顯著增加,以Ⅰ型膠原為主,鈣鹽沉積顯著增加,TNAP,TGF-β1表達顯著增加,TGF-β1、BMP2、Col1a1、Col2a1 mRNA表達顯著增加(P均0.05)。與UUO+生理鹽水組相比,UUO+Ins16組小鼠腎臟膠原面積,鈣鹽沉積,TGF-β1,TNAP,TGF-β1、BMP2、Col1a1、Col2a1mRNA表達均顯著降低(P均0.05)。結論 采用Ins16抑制TNAP具有抗UUO誘導的腎臟纖維化及鈣化作用,其機制可能與調控TGF-β1、Collagen Ⅰ、BMP2、Collagen Ⅱ表達水平有關。
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R54;R692
【圖文】：

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本文編號：2776283