【摘要】：目的建立新西蘭兔同種異體原位腎移植模型,采用經(jīng)腎動脈順行持續(xù)低溫灌注與經(jīng)腎靜脈逆行持續(xù)低溫灌注的兩種方法保存兔移植腎并行腎移植手術(shù),觀察兩組術(shù)后血清肌酐、尿量、移植腎組織病理、移植腎組織中丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)的表達(dá)水平,初步探討不同灌注方法對供腎質(zhì)量的影響,為臨床擴(kuò)大使用邊緣供腎提供新的策略和思路。方法1.建立熱缺血損傷后同種異體原位腎移植動物模型:供體新西蘭兔左側(cè)腎動脈阻斷45min形成供腎熱缺血損傷,采用順行持續(xù)低溫灌注與逆行持續(xù)低溫灌注兩種不同方法灌注2小時后,將其原位移植到受體,移植完成后切除受體右腎,術(shù)后使用環(huán)孢素A抗排斥,以此來完成實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷闹谱鳌?.健康成年新西蘭雄性兔60只,購買于南華大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)室,體重2-3kg。采用隨機(jī)數(shù)字表法將兔分為兩組,順行持續(xù)低溫灌注組(A組)與逆行持續(xù)低溫灌注組(B組)每組30只,再于A、B兩組組內(nèi)隨機(jī)分為供體和受體兩組,每組各15只。比較順行灌注與逆行灌注兩種不同灌注組受體新西蘭兔術(shù)后第一天、術(shù)后第三天、術(shù)后第五天的血清肌酐水平及尿量情況;觀察術(shù)后第五天移植腎組織HE染色病理改變,并用分光光度法檢測移植腎組織MDA含量、SOD活力表達(dá)情況。結(jié)果1.血清肌酐變化情況:A組(順行灌注組)術(shù)后第一天、第三天、第五天血清肌酐值分別為(398.36±37.28)umol/L、(318.97±18.34)umol/L、(178.01±9.44)umol/L;B組(逆行灌注組)術(shù)后第一天、第三天、第五天血清肌酐值分別為(417.51±34.28)umol/L、(330.54±20.72)umol/L、(186.21±13.81)umol/L。逆行灌注組術(shù)后血清肌酐值與順行灌注組術(shù)后血清肌酐值進(jìn)行比較無明顯差別,P0.05,差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義。2.尿量變化情況:A組(順行灌注組)術(shù)后第1天、第3天、第5天尿量分別為(74.60±5.55)ml、(93.72±8.89)ml、(137.58±9.79)ml;B組(逆行灌注組)術(shù)后第1天、第3天、第5天尿量分別為(71.18±5.79)ml、(88.16±6.84)ml、(130.99±12.11)ml。逆行灌注組術(shù)后尿量與順行灌注組術(shù)后尿量進(jìn)行比較無明顯差別,P0.05,差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義。3.移植腎組織HE染色病理情況:A組(順行灌注組)、B組(逆行灌注組)術(shù)后第五天均可見腎小球及周圍毛細(xì)血管內(nèi)有少量微血栓物質(zhì)形成;腎小管管腔輕度擴(kuò)大;間質(zhì)有少許充血水腫和炎癥細(xì)胞分布;腎臟組織結(jié)構(gòu)基本清晰。4.采用分光光度法檢測移植腎組織MDA含量表達(dá)情況:A組(順行灌注組)與B組(逆行灌注組)術(shù)后第五天MDA含量分別為(6.65±0.60)nmol/mgprot和(7.02±0.55)nmol/mgprot。逆行灌注組術(shù)后MDA含量與順行灌注組術(shù)后MDA含量進(jìn)行比較,P0.05,差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義。5.采用分光光度法檢測移植腎組織SOD活力表達(dá)情況:A組(順行灌注組)與B組(逆行灌注組)術(shù)后第五天SOD活力分別為(369.35±35.37)U/mgprot和(349.13±31.96)U/mgprot。逆行灌注組術(shù)后SOD活力與順行灌注組術(shù)后SOD活力進(jìn)行比較無明顯差別,P0.05,差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論逆行灌注法不僅同順行灌注法一樣可以保護(hù)移植腎的功能,而且還可以作為腎動脈畸形、損傷的移植腎灌注不良時的一種補(bǔ)救灌洗措施。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R699.2
【圖文】：

正常新西蘭兔左腎

術(shù)前禁食 12h，自由飲水，避免影響術(shù)中操作和利于術(shù)后快速康復(fù)。術(shù)前 10 分鐘將 3mg/kg 肝素注入血液達(dá)到全身肝素化。2.3.2 術(shù)前麻醉采用 20%烏拉坦按 5ml/kg 劑量經(jīng)耳緣靜脈注射進(jìn)行全身麻醉，將新西蘭兔仰臥于手術(shù)臺上，頭用兔頭固定夾固定，四肢用繩套固定，用 70%酒精將手術(shù)器械浸泡消毒，手術(shù)區(qū)域常規(guī)用備皮刀備皮、絡(luò)合碘消毒 3 遍、鋪無菌手術(shù)單。2.3.3 移植供腎缺血模型沿腹部正中線作切口，依次切開皮膚、肌肉，打開腹腔 ，兩側(cè)組織用拉鉤牽拉固定，用濕紗布覆蓋腹腔臟器并向右側(cè)推開，顯露腹腔血管及左側(cè)腹膜后腎臟。沿左腎外側(cè)緣打開后腹膜，用濕棉簽及玻璃分針仔細(xì)分離腎周脂肪與筋膜，游離左側(cè)腎臟動脈、靜脈至起始部，用 7-0 細(xì)絲線分別在腎臟動、靜脈起始部予以結(jié)扎，并記錄 45min 熱缺血時間�？梢娔I臟顏色由紅變暗，建立熱缺血損傷供腎模型，模擬臨床 DCD 腎臟熱缺血過程。

管呈 15-30 度角用 24G 密閉式靜脈留置針穿刺，見回血后，降低角度再將穿刺針推進(jìn)少許，取出針芯后固定留置針，連接靜脈輸液器。用顯微剪刀在靠近腎動脈起始結(jié)扎處將提起的腎動脈剪斷，做灌注的流出口。將含有肝素的冷藏（0-4℃）高滲枸櫞酸鹽嘌呤溶液（HCA 液）500ml 通過靜脈輸液器向腎靜脈端進(jìn)行逆行持續(xù)灌注，設(shè)定灌注流速為 10-15ml/min，灌注壓力為 50cmH2O。灌注過程中用冰生理鹽水（0-4℃）持續(xù)冷敷腎臟，用棉簽自腎周向腎門輕撫腎臟，并用 50ml注射器將流出的液體及時抽吸干凈。灌注過程中可見供腎不斷變白，流出液由紅色轉(zhuǎn)為清亮，并持續(xù)到規(guī)定時間為止(整個過程約 2 小時)。供腎灌注滿意后，分離左腎脂肪及筋膜，電凝并結(jié)扎左腎上腺靜脈及精索靜脈等交通分支。游離輸尿管直至近膀胱處剪斷，注意保留部分脂肪組織以利于血供。將腎動脈（或腎靜脈）穿刺針取出，并將腎動、靜脈在起始處剪斷，用 9-0尼龍線在靜脈開口處縫合一針用以標(biāo)記，將完全游離左腎迅速取出并置入腎臟保存液中保存?zhèn)溆谩?

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本文編號：2770207