【摘要】：腫瘤的傳統(tǒng)治療方法包括手術(shù)治療、放療、化療,根治性手術(shù)對大部分早期腫瘤有較好的療效,但大部分腫瘤早期發(fā)病較為隱匿,臨床發(fā)現(xiàn)已是晚期,失去根治性手術(shù)機(jī)會,即便手術(shù),依然要面對束后復(fù)發(fā)的難題。放化療對抗腫瘤有一定療效,但由于晚期腫瘤病人全身基礎(chǔ)情況較差,很難耐受高劑量的放化療帶來的副作用,這讓傳統(tǒng)方法束手無策然。隨著免疫學(xué)的興起和對腫瘤免疫治療的研究,人們認(rèn)識到由于腫瘤微環(huán)境和腫瘤細(xì)胞的負(fù)性調(diào)節(jié)作用,體內(nèi)的免疫系統(tǒng)失去平衡,腫瘤細(xì)胞處于免疫抑制和逃逸狀態(tài),這是腫瘤造成復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的根本原因。所以,增強(qiáng)胃癌患者機(jī)體免疫系統(tǒng)對腫瘤免疫應(yīng)答成為對抗胃癌的新突破口。自2010年FDA批準(zhǔn)了人類歷史上首個利用患者自身樹突細(xì)胞治療轉(zhuǎn)移性前列腺癌的腫瘤疫苗sipuleucel-T~([1]),DC疫苗治療有較為突出的研究成果~([2-4])�，F(xiàn)階段以樹突細(xì)胞(Dendritic cell,DC)為基礎(chǔ)的治療性腫瘤疫苗DC-CIK是免疫治療的研究熱點~([5])。但此治療方法目前還處于臨床試驗階段所以首先我們要通過臨床數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析其安全性及有效性,在安全性的前提下尋找DC的優(yōu)化策略提高其有效性是發(fā)展新一代DC疫苗和提高其臨床療效的關(guān)鍵。故本研究收集72例晚期腎癌DC-CIK細(xì)胞治療的臨床試驗的實驗室數(shù)據(jù)和隨訪數(shù)據(jù),通過實驗室檢測指標(biāo)及回訪結(jié)果來評估臨床療效和預(yù)后。通過分析發(fā)現(xiàn)DC-CIK疫苗的安全性尚可,但是有效性還有待提高,這是由于患者自身腫瘤對體內(nèi)免疫系統(tǒng)的抑制,導(dǎo)致DC發(fā)育不完善不能發(fā)揮良好的作用有關(guān),TOLL樣8(Tolllikereceptors,TLR8)可在DC中表達(dá)并通過使NFKB磷酸化促進(jìn)細(xì)胞因子TNF-α、IL-12等釋放和DC成熟,增強(qiáng)DC抗原提呈能力~([7]),這些細(xì)胞因子可誘導(dǎo)輔助性T細(xì)胞(T helper cell,Th)向Th1方向漂移,有利于抑制調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Regulatory cell,Treg)的增殖,從而逆轉(zhuǎn)免疫耐受增強(qiáng)抗腫瘤作用,但TLR8在胃癌患者DC中調(diào)節(jié)作用還未可知。本研究選擇新型高選擇性TLR8激動劑VTX-2337刺激胃癌患者DC,檢測其對免疫功能的調(diào)節(jié)作用以及調(diào)節(jié)后的DC對T淋巴細(xì)胞的活化作用,驗證了VTX-2337在胃癌患者DC中可促進(jìn)DC成熟增強(qiáng)其免疫功能,并作為一種佐劑在DC體外誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞活化中發(fā)揮重要作用。據(jù)2014年王品教授~([6])在Science中報道,DC中有一種影響其分化成熟、抗原識別提呈能力的LncRNA,被命名為Lnc-DC,該LncRNA通過直接與胞質(zhì)中的STAT3結(jié)合發(fā)揮作用。但在腫瘤患者DC中,這種LncRNA表達(dá)量是否正常還未可知最近有研究證明,已有研究證明Lnc-DC調(diào)節(jié)DC中TLR9/STAT3信號傳導(dǎo),介導(dǎo)HBV的免疫應(yīng)答。因此推測Lnc-DC與TLR8在胃癌患者DC中是存在協(xié)同作用,通過熒光定量PCR檢測各組DC中Lnc-DC表達(dá)水平。因此本文目的:1.通過臨床試驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計,做DC-CIK治療晚期腎癌的臨床療效和預(yù)后分析,驗證DC-CIK細(xì)胞治療的安全性;2.探索TLR8激動劑VTX-2337對胃癌病人DC體外培養(yǎng)的調(diào)節(jié)作用;3.Lnc-DC在正常人和胃癌患者DC中以及激動劑組和對照組中表達(dá)量是否存在差異;方法:1.統(tǒng)計參加DC-CIK臨床試驗的晚期腎癌患者相關(guān)檢驗數(shù)據(jù),用SPSS16.0進(jìn)行分析,整理并回訪患者的生存期做預(yù)后分析。2.TLR8激動劑VTX-2337對胃癌患者樹突細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用以及相關(guān)信號通路的研究(1)TLR8激動劑對胃癌患者DC進(jìn)行刺激;(2)Western blot檢測DC中NF-κB、pNF-κB蛋白水平用以證實TLR8激動劑發(fā)揮作用;(3)流式檢測DC表面成熟標(biāo)志分子(HLA-DR、CD11C、CD80、CD86、CD54、CD83);(4)ELISA檢測培養(yǎng)上清細(xì)胞因子IL-12、TNF-α的表達(dá)水平;(5)DC-T淋巴細(xì)胞共培養(yǎng),流式檢測T細(xì)胞表面活化標(biāo)志(HLA-DRCD3、CD28)。(6)qPCR檢測正常人與胃癌患者DC中以及激動劑組與對照組中l(wèi)nc-DC的含量并進(jìn)行比較;結(jié)果:第一部分研究結(jié)果:1.72例腎癌患者經(jīng)DC-CIK細(xì)胞免疫治療后,數(shù)據(jù)不全及失訪30例,剩余42例客觀反應(yīng)率為33.33%,疾病控制率為73.81%;1年生存率為83%,2年生存率為78%,3年生存率維持在67.8%。2.外周血CD3+CD8+細(xì)胞比例顯著升高(P=0.009),CD4~+CD25~+細(xì)胞、CD3~+CD4~+細(xì)胞、CD4~+CD8~+比例明顯下降(P=0.026,P=0.028,P=0.04)。3.與治療前相比,甘油三酯水平升高(P=0.003),Pearson相關(guān)性分析顯示晚期腎癌患者血清甘油三酯與B細(xì)胞比例呈正相關(guān)(r=0.387,P=0.011)高密度膽固醇與NK細(xì)胞比例呈正相關(guān)(r=0.362,P=0.018),高密度膽固醇與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例呈負(fù)相關(guān)(r=-0.303,P=0.049)4單因素分析顯示TNM分期、細(xì)胞治療次數(shù)、治療前KPS評分為DC-CIK治療腎癌預(yù)后的影響因素(P0.05);多因素分析顯示TNM分期是獨立預(yù)后因素。第二部分研究結(jié)果:1.與對照組相比較,TLR8激動劑VTX-2337作用后,胃癌患者的DC中pNF-κB蛋白表達(dá)水平升高。2.DC表面成熟標(biāo)志分子HLA-DR、CD11C、CD80、CD86、CD54、CD83表達(dá)上調(diào)。3.實驗組培養(yǎng)上清細(xì)胞因子IL-12、TNF-α的表達(dá)高于對照組。4.DC-T淋巴細(xì)胞共培養(yǎng),實驗組T細(xì)胞表面活化標(biāo)志HLA-DRCD3、CD28表達(dá)無顯著差異。5.正常人DC中Lnc-DC表達(dá)量高于胃癌患者(P0.05)。激動劑組Lnc-DC表達(dá)量與對照組相比無顯著差異。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R737.11;R735.2

【參考文獻(xiàn)】

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1 江龍委;黃偉謙;姚露;張燕;艾月琴;鄭R

本文編號：2741726