發(fā)布時間：2020-06-23 17:48

【摘要】：【目的】 通過阻斷CD28-B7和CD40-CD40L共刺激通路，經(jīng)PLNCX2-FLAG-CTLA4Ig和PLNCX2-HA-CD40Ig雙基因包裝成逆轉(zhuǎn)錄病毒后局部轉(zhuǎn)染入豚鼠腎臟，觀察CTLA4Ig和CD40Ig局部轉(zhuǎn)染對豚鼠到SD大鼠異種腎移植免疫耐受的誘導(dǎo)作用，為防治異種腎移植免疫排斥反應(yīng)尋找新的途徑。 【方法】 選用雄性SD大鼠（12-14周齡）、雄性豚鼠（12-14周齡）各40只，隨機(jī)分為4組（每組SD大鼠、豚鼠各十只）。手術(shù)方式為將CTLA4Ig和CD40Ig逆轉(zhuǎn)錄病毒基因局部轉(zhuǎn)染豚鼠腎臟，左側(cè)腎臟異位移植到SD大鼠頸部，右側(cè)腎臟冰塊保存。第1組為空載體逆轉(zhuǎn)錄病毒對照組（A組）；第2組為CD40Ig基因逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)染組（B組）；第3組為CTLA4Ig基因逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)染組（C組）；第4組為CTLA4Ig和CD40Ig雙基因逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)染組（D組）。采用Westen bloting檢測豚鼠右側(cè)腎臟逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)染效率。觀察各組受鼠術(shù)后移植腎存活時間、受鼠存活時間。采用HE染色觀察術(shù)后各組大鼠移植腎排斥反應(yīng)級別，免疫組化技術(shù)檢測Bax蛋白的表達(dá)，RT-PCR檢測bcl-2/Bax mRNA的表達(dá)，并用流式細(xì)胞儀檢測移植腎細(xì)胞凋亡率。 【結(jié)果】 1、Western blotting 供腎局部轉(zhuǎn)染CD40Ig或CTLA4Ig后，其組織中可見CD40Ig和（或）CTLA4Ig表達(dá)。A組無CD40Ig和CTLA4Ig表達(dá)，B組可見CD40Ig表達(dá)，C組可見CTLA4Ig表達(dá)，D組可見CD40Ig和CTLA4Ig都表達(dá)。 2.移植腎及受鼠存活時間 A組大鼠移植腎存活時間為（8.1±2.1）d，SD大鼠的存活時間為(9.5±2.3)d； B組、C組和D組移植腎的存活時間分別為(13.1±2.2)d、（12.4±2.6)d和（16.6±3.0)d,受鼠存活時間為(14.4±3.1)d、（14.5±3.3)d和（18.8±2.7)d，均明顯長于A組（P0.05)，其中D組移植腎及SD大鼠存活時間最長，與其他3組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05)。而B、C兩組之間比較無明顯統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05）。 3. HE染色 A組術(shù)后移植腎組織HE染色可見大量淋巴細(xì)胞浸潤，Banff07移植腎病理分級為IIB-III級，提示移植腎排斥反應(yīng)強烈。B組、C組也可見淋巴細(xì)胞浸潤，但表達(dá)強度低于A組，Banff07移植腎病理分級為IIA-III級。而D組淋巴細(xì)胞浸潤最少，Banff07移植腎病理分級為IA-IIB級,明顯低于其他三組。 4.免疫組織化學(xué)檢測 A組移植腎組織Bax表達(dá)都呈棕褐色，為強陽性表達(dá)，強陽性率100％，B組、C組移植腎組織強陽性率分別為60％和80％，D組有1例成強陽性反應(yīng)，4例成弱陽性反應(yīng)，強陽性率20％（P 0.05)。 5.RT-PCR結(jié)果 RT-PCR結(jié)果顯示,B、C、D組移植腎組織Bax mRNA的表達(dá)明顯低于A組，其中以D組移植腎組織Bax mRNA的表達(dá)最低，bcl-2mRNA表達(dá)則相反，D組表達(dá)最高，A組表達(dá)最低（P0.05）。而B、C兩組之間比較無明顯統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05）。 6.移植腎細(xì)胞凋亡情況 B、C兩組細(xì)胞凋亡率為（24.34±2.78）%、（26.21±2.69）%，明顯低于A組（54.69±6.25）%（P0.05），而D組細(xì)胞凋亡率最低，為（15.03±1.21）%，與A、B、C組相比有顯著差異（P0.05）。而B、C兩組之間比較無明顯統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05）。 【結(jié)論】 1、CTLA4Ig和CD40Ig基因逆轉(zhuǎn)錄病毒局部轉(zhuǎn)染腎臟均具有延長移植腎存活時間的作用，但兩者本身并沒有明顯差異。 2、同時轉(zhuǎn)染CTLA4Ig和CD40Ig雙基因逆轉(zhuǎn)錄病毒，能顯著減輕異種移植腎的排斥反應(yīng)，延長移植腎的存活時間。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R699.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2727687