【摘要】：目的:本實(shí)驗(yàn)擬通過大鼠不同缺血再灌注時(shí)間點(diǎn)的損傷性腎勻漿上清液在體外模擬急性腎損傷的微環(huán)境,誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone mesenchymal stem cells,BMSCs)的增殖及分化,探討腎臟缺血再灌注后最適合BMSCs增殖、分化的時(shí)間。方法:采用貼壁培養(yǎng)法體外分離、培養(yǎng)大鼠BMSCs,分為陰性對照組(干細(xì)胞培養(yǎng)基);正常腎臟勻漿組(干細(xì)胞培養(yǎng)基+10%大鼠正常腎臟勻漿上清液);缺血再灌注12h組(干細(xì)胞培養(yǎng)基+10%大鼠缺血再灌注12h腎臟勻漿上清液);缺血再灌注24h組(干細(xì)胞培養(yǎng)基+10%大鼠缺血再灌注24h腎臟勻漿上清液);缺血再灌注48h組(干細(xì)胞培養(yǎng)基+10%大鼠缺血再灌注48h腎臟勻漿上清液);缺血再灌注72h組(干細(xì)胞培養(yǎng)基+10%大鼠缺血再灌注72h腎臟勻漿上清液);缺血再灌注96h組(干細(xì)胞培養(yǎng)基+10%大鼠缺血再灌注96h腎臟勻漿上清液)。用CCK8法及細(xì)胞板計(jì)數(shù)法觀察腎臟勻漿對BMSCs增殖的影響;在第1d、3d、5d、7d、9d、11d、13d、15d、17d、19d、21d、23d、25d、27d在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變;采用Western Blot以及逆轉(zhuǎn)錄酶聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)評估細(xì)胞內(nèi)角蛋白18(CK-18)的表達(dá),觀察各組對BMSCs的分化的影響。結(jié)果:1.BMSCs培養(yǎng)至第3代時(shí)可見貼壁生長的呈排列密集、旋渦狀、形態(tài)相對均一的長梭形樣細(xì)胞群;流式細(xì)胞術(shù)鑒定細(xì)胞表型CD29,CD90表達(dá)陽性,CD34,CD45表達(dá)陰性;BMSCs經(jīng)成脂誘導(dǎo)后,能分化為脂肪細(xì)胞。2.用細(xì)胞板計(jì)數(shù)法及CCK8法檢測細(xì)胞增殖,各組進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,缺血再灌注72h腎臟勻漿上清對BMSCs的增殖活性最好。3.通過顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化,正常腎臟勻漿上清液、缺血再灌注12h、24h、48h、96h腎臟勻漿上清液干預(yù)BMSCs,與缺血再灌注72h腎臟勻漿上清液干預(yù)BMSCs相比,缺血再灌注72h組分化的細(xì)胞數(shù)量最多;陰性對照組BMSCs形態(tài)為長梭形樣,極少數(shù)細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化。4.采用蛋白免疫印跡法及定量逆轉(zhuǎn)錄酶聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)評估檢測誘導(dǎo)后CK-18的表達(dá)。其中以缺血再灌注72h的腎臟勻漿上清液誘導(dǎo)細(xì)胞CK-18的表達(dá)最為明顯;陰性對照組表達(dá)CK-18可能與細(xì)胞受外界環(huán)境影響發(fā)生變化。結(jié)論:1.缺血再灌注損傷大鼠腎臟勻漿在體外可以誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向腎小管上皮樣細(xì)胞分化。2.腎臟缺血再灌注時(shí)間不同,存在不同的損傷微環(huán)境。3.急性損傷修復(fù)過程中可能存在一個(gè)有利于干細(xì)胞修復(fù)的時(shí)間點(diǎn),本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在缺血再灌注72h進(jìn)行干細(xì)胞治療可能有助于最大程度的發(fā)揮干細(xì)胞作用。
【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R692.5
【圖文】：

BMSCs形態(tài)圖

流式細(xì)胞術(shù)對BMSCs表面抗原鑒定

【參考文獻(xiàn)】

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1 段大鵬;蘇權(quán);胡偉;尤武林;黨曉謙;王坤正;;同種異體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療大鼠脊髓損傷的時(shí)效性分析[J];中國骨傷;2013年10期

2 劉世民;吳曉牧;曹文峰;張洪連;肖麗華;許自強(qiáng);周鑫華;張昆南;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療腦缺血大鼠時(shí)間窗的研究[J];中華老年心腦血管病雜志;2011年09期

3 焦艷;江家驥;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植時(shí)機(jī)及移植時(shí)間長短對大鼠肝纖維化病變進(jìn)程的影響[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2009年23期

4 張中華;王共先;汪泱;胡峰;黃學(xué)明;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體內(nèi)分化為腎小管上皮細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[J];江西醫(yī)學(xué)檢驗(yàn);2007年01期

本文編號：2713208