【摘要】：目的:腎癌的發(fā)病率和死亡率逐年升高,傳統(tǒng)手術(shù)術(shù)后復(fù)發(fā)率也很高,因此本實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖菫榱祟A(yù)測(cè)腎癌的抗腫瘤藥物新靶點(diǎn),尋找高效的抗腎癌藥物。方法:從手術(shù)切除中獲得5對(duì)腎癌組織和癌旁的腎組織,并使用QExactive Plus與nanoLC系統(tǒng)以無標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法進(jìn)行分析,篩選出差異性表達(dá)的蛋白。通過qRT-PCR、Western blotting和IHC方法在小樣本水平上驗(yàn)證差異性表達(dá)蛋白,如PYGL,ANXA4,PSMB8,ATP5B。在大樣本水平上進(jìn)一步檢測(cè),包括用新技術(shù)高通量免疫印跡方法(QDB)檢測(cè)五十個(gè)腎癌病人的腎癌組織及其癌旁腎組織中ANXA4,PYGL,PSMB8和ATP5B的絕對(duì)定量。體內(nèi)驗(yàn)證,用腎細(xì)胞癌細(xì)胞(786-0)轉(zhuǎn)染siPYGL,轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞用xCELLigence實(shí)時(shí)細(xì)胞分析儀(RTCA)-DP系統(tǒng)檢測(cè)細(xì)胞增殖和遷移功能。結(jié)果:通過質(zhì)譜方法共檢測(cè)到2091種蛋白,其中532種蛋白表達(dá)在腎癌組織及其癌旁腎組織中具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在50對(duì)組織中,腎癌組織的PYGL絕對(duì)定量的中位值顯著高于癌旁腎組織(1.21 nml/g比0.16 nmol/g,P0.0001,配對(duì) t檢驗(yàn))。PYGL 的 ROC分析顯示 AUC為 0.93(P0.001;95%CI 0.87-0.99)。當(dāng)PYGL臨界值為0.35nmol/g時(shí),PYGL的敏感性為92%,特異性為92%,總體準(zhǔn)確性為96%。而ANXA4、PSMB8和ATP5B的總體準(zhǔn)確率分別為92%、82%、70%。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)顯示,敲除PYGL之后,細(xì)胞的增殖和遷移功能均有所降低。結(jié)論:我們通過定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法檢測(cè)了腎癌組織及其癌旁腎組織中差異性表達(dá)蛋白,并對(duì)其中多種蛋白進(jìn)行了分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測(cè),并在群體水平上進(jìn)行了驗(yàn)證。篩選出了差異性明顯并且表達(dá)穩(wěn)定的蛋白-PYGL。進(jìn)一步分析得到PYGL有可能成為腎癌的抗腫瘤藥物新靶點(diǎn)。
【圖文】：

圖２－１：實(shí)驗(yàn)路線逡逑１３逡逑

邐ｐｓｍｂｓ逡逑圖２－２：在小范圍樣本量中檢測(cè)ＰＹＧＬ、ＡＮＸＡ４、ＰＳＭＢ８和ＡＴＰ５Ｂ的相對(duì)表達(dá)水平逡逑圖２－２．以上圖片是用分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)在小樣本上驗(yàn)證差異性表達(dá)蛋白。（Ａ）該圖為逡逑ｑＲＴ－ＰＣＲ邋實(shí)驗(yàn)檢測(cè)邋ＰＹＧＬ、ＡＮＸＡ４、ＰＳＭＢ８邋和邋ＡＴＰ５Ｂ邋結(jié)果圖（ｎ＝５），ＡＴＰ５Ｂ，ＰＹＧＬ，逡逑２２逡逑
【學(xué)位授予單位】：濱州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R737.11

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本文編號(hào)：2710094