【摘要】：缺血再灌注損傷(ischemia reperfusion injury,IRI)是腎移植術后導致移植腎延遲恢復(delay graft function,DGF)的主要原因,會對移植術后受者預后產(chǎn)生諸多不良影響,如何預防和緩解腎臟IRI對于提高移植物遠期生存十分關鍵。近年來的研究表明:IRI過程中的炎性細胞及炎性因子的浸潤是促進IRI發(fā)生發(fā)展的一個重要因素,而以調節(jié)性T細胞(regulatory T cell,Treg)為代表的免疫抑制型細胞則可有效緩解IRI過程中的炎癥反應,增加腎臟中Treg細胞的浸潤可減少IRI過程中的組織損傷、保護腎臟功能。神經(jīng)纖毛蛋白1(neuropilin 1,NRP1)對于Treg細胞的免疫調節(jié)功能的維持極為重要,研究證實:NRP1可作為受體與信號素4A(semaphorin 4a,SEMA4A)結合,通過抑制Treg細胞內(nèi)Akt-mTOR信號通路來促進Treg細胞穩(wěn)定性及功能性,進而促進腫瘤組織中Treg細胞的浸潤。但目前針對SEMA4A-NRP1軸在腎臟IRI條件下的作用尚不明了。因此,在本研究中,我們以重組嵌合蛋白SEMA4A-Fc作為干預措施,觀察SEMA4A-Fc對腎臟Treg細胞的浸潤、腎臟IRI發(fā)生發(fā)展的影響,并對可能的分子生物學機制進行探究。研究結果提示:在野生型小鼠中,IRI術前使用SEMA4A-Fc可降低小鼠IRI后血肌酐、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、減少組織損傷及腎臟細胞凋亡、減少TNF-α等炎癥因子浸潤。同時流式細胞分析檢測結果顯示:SEMA4A-Fc處理后小鼠IRI腎臟中中性粒細胞、巨噬細胞浸潤減少,而Treg浸潤顯著增加。而在使用抗CD25單抗進行誘導清除Treg后,上述SEMA4A-Fc緩解腎臟IRI的作用被消除,證明SEMA4A-Fc對于IRI的緩解作用主要是通過Treg細胞來完成。在進一步基于條件基因敲除小鼠—oxP3~(Cre)NRP1~(f/f)小鼠模型的實驗中,結果提示:Treg細胞NRP1特異性敲除可逆轉SEMA4A-Fc對小鼠腎臟IRI的緩解作用,同時可消除SEMA4A-Fc對IRI腎臟Treg細胞浸潤的促進作用;說明NRP1是SEMA4A促進Treg細胞浸潤、緩解腎臟IRI的關鍵分子。而在機制研究方面,體內(nèi)及體外實驗結果提示:SEMA4A-Fc干預可促進Treg細胞中NRP1對PTEN的募集,同時可降低pAkt(S473/T308)、pS6K1水平,而在NRP1~(f/f)FoxP3~(Cre)小鼠Treg細胞中無法觀察到上述變化;說明SEMA4A結合NRP1可促進NRP1募集PTEN,抑制Akt-mTOR信號通路的激活,進而增加腎臟中Treg細胞的穩(wěn)定性及功能性。綜上,我們的研究揭示了如下觀點:SEMA4A與NRP1結合可緩解腎臟IRI的發(fā)生及發(fā)展;SEMA4A可通過結合Treg細胞上的NRP1,抑制Akt-mTOR信號通路,促進IRI腎臟中Treg細胞的浸潤與功能,從而減少腎臟IRI過程中炎癥反應的強度,最終緩解IRI過程中腎臟的組織損傷。
【圖文】：

邐解放軍醫(yī)學院博士學位論文邐逡逑二、實驗結果逡逑１．邋ＳＥＭＡ４Ａ－ＦＣ干預可保護小鼠缺血再灌注損傷腎臟功能逡逑行雙側腎臟ＩＲＩ之前２４ｈ及手術當天對Ｃ５７ＢＬ／６小鼠使用重組人ＳＥＭＡ４Ａ－ＦＣ或逡逑ＩｇＧ邋（對照），于不同時間點（術前Ｄ０，，術后Ｄｌ，Ｄ３，Ｄ５）尾靜脈采血，分別檢測逡逑小鼠血肌酐及尿素氮（ｂｌｏｏｄ邋ｕｒｅａ邋ｎｉｔｒｏｇｅｎ，邋ＢＵＮ）水平。結果提示：在基線水平無差逡逑別的情況下，ＳＥＭＡ４Ａ－Ｆｃ／ＩＲＩ組小鼠血肌酐及尿素氮水平在術后Ｉｄ、３ｄ、５ｄ時間點逡逑均顯著高于邋ＩｇＧ／ＩＲＩ邋（ｐ＜０．０１、ｐ＜０．０１、ｐ＜０．０５）（如圖邋１、表邋１／２邋示）。逡逑該研究結果說明：ＩＲＩ前使用ＳＥＭＡ４Ａ－ＦＣ可保護ＩＲＩ腎臟功能。逡逑

Ｓｈａｍ／ＩｇＧ邋０．２±０．４５；邋Ｓｈａｍ／ＳＥＭＡ４Ａ邋０．４±０．５５），ＩＲＩ／ＩｇＧ邋組小鼠腎小管損傷比例高、逡逑程度重，而邋ＳＥＭＡ４Ａ／ＩＲＩ邋組較邋ＩｇＧ／ＩＲＩ邋組損傷明顯減輕（２．４±０．５５邋ｖｓ．邋３．６±０．５５，邋ｐ＝０．０１４）逡逑（如圖２）。逡逑該研究結果說明ＳＥＭＡ４Ａ－ＦＣ干預可有效緩解缺血再灌注損傷后腎小管損傷程度。逡逑ａ逡逑Ｓｈａｍ邐ＩＲＩ逡逑ＩｇＧ邋ＳＥＭＡ４Ａ－ＦＣ邋ＩｇＧ邐ＳＥＭＡ４Ａ－Ｆｃ逡逑２０逡逑
【學位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R699.2

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本文編號：2702456