發(fā)布時(shí)間：2020-06-01 17:29

【摘要】：目的:研究mi R-7-5p對(duì)前列腺癌細(xì)胞系中在能量代謝途徑以及生物學(xué)功能中相關(guān)作用,初步探尋其在前列腺癌中相關(guān)作用機(jī)制。方法:LNCa P、DU145、PC3細(xì)胞株體外轉(zhuǎn)染mi R-7-5p慢病毒、mimics,CCK-8實(shí)驗(yàn)及克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖克隆能力。另外,通過葡萄糖及乳酸試劑盒檢測(cè)轉(zhuǎn)染完48-72小時(shí)mi R-7-5p慢病毒的細(xì)胞上清,檢測(cè)葡萄糖及乳酸變化水平,通過ELISA試劑盒檢測(cè)葡萄糖代謝途徑中相關(guān)酶G6PD、NADPH、CITRATE的含量的變化,通過數(shù)據(jù)庫比對(duì)發(fā)現(xiàn),mi R-7-5p與MEG3結(jié)合且mi R-7-5p與MEG3表達(dá)有一定相關(guān)性,另外在LNCa P、DU145、PC3細(xì)胞株體外轉(zhuǎn)染mi R-7-5p INHIBITOR,CCK-8實(shí)驗(yàn)及克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖能力變化.實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染完慢病毒的前列腺癌細(xì)胞中mi R-7-5p的表達(dá),送基因測(cè)序,進(jìn)一步在PC3細(xì)胞中過表達(dá)帶有Biotin標(biāo)記的mi R-7-5p,通過RNA PULL DOWN實(shí)驗(yàn)后送測(cè)序,結(jié)合生物學(xué)信息網(wǎng)站預(yù)測(cè),選擇交集靶基因,回復(fù)證明下游通路中基因蛋白水平改變,明確下游信號(hào)通路,進(jìn)一步明確糖代謝作用機(jī)制及相關(guān)信號(hào)通路。結(jié)果:CCK-8法實(shí)驗(yàn)表明過表達(dá)mi R-7-5p慢病毒及mimics后明顯抑制前列腺癌細(xì)胞LNCa P、DU145、PC3細(xì)胞的增殖能力;體外克隆實(shí)驗(yàn)表明,過表達(dá)mi R-7-5p后抑制前列腺癌細(xì)胞LNCa P、DU145、PC3的克隆形成能力。前列腺癌細(xì)胞中過表達(dá)mi R-7-5p慢病毒后明顯抑制前列腺癌細(xì)胞的葡萄糖攝取,葡萄糖的消耗量明顯降低,同時(shí)乳酸產(chǎn)量較對(duì)照組明顯減少,且通過ELISA試劑盒檢測(cè)糖代謝途徑中G6PD、NADPH、CITRATE等代謝酶含量較對(duì)照組有明顯下降,通過RNA pull down和轉(zhuǎn)錄組及TARGETSCAN等基因網(wǎng)站預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)PIK3CD、IL6R為下游靶基因,進(jìn)一步尋找糖代謝相關(guān)信號(hào)通路,并了解mi R-7-5p在前列腺癌中相關(guān)抑癌作用。結(jié)論:mi R-7-5p發(fā)揮抑癌基因的作用,mi R-7-5p能夠明顯抑制前列腺癌細(xì)胞的葡萄糖攝取,mi R-7-5p可以結(jié)合MEG3,抑制前列腺癌細(xì)胞的增殖及克隆,明確了其在前列腺癌中具有抑癌作用。
【圖文】：

圖 1、MEG3 的含量在不同的組織中含量明顯不同，癌組織要比正常組織低，，而轉(zhuǎn)移性癌組織含量要比癌組織低，且隨著前列腺癌 Gleason 評(píng)分增加 MEG3 表達(dá)也是下降2. MEG3 表達(dá)量的不同對(duì)患者生存率的影響也不相同圖 2、高表達(dá) MEG3 的患者的生存率要比低表達(dá)的患者預(yù)后好很多。

腺癌組織、轉(zhuǎn)移性前列腺癌中含量明顯不同。圖 1、MEG3 的含量在不同的組織中含量明顯不同，癌組織要比正常組織低，而轉(zhuǎn)移性癌組織含量要比癌組織低，且隨著前列腺癌 Gleason 評(píng)分增加 MEG3 表達(dá)也是下降2. MEG3 表達(dá)量的不同對(duì)患者生存率的影響也不相同
【學(xué)位授予單位】：東南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R737.25

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本文編號(hào)：2691822