【摘要】：目的:膀胱癌是當今世界發(fā)病率最高而且發(fā)病機制最復雜的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤之一。本課題組長期致力于錨蛋白重復序列6Diversin在腫瘤的發(fā)生發(fā)展侵襲轉移機制的相關研究,前期結果顯示Diversin在非小細胞肺癌,三陰乳腺癌,神經(jīng)膠質瘤,尤其是膀胱癌組織中表達水平均顯著高于癌旁組織。而且在非小細胞肺癌中Diversin通過激活Wnt/JNK通路對非小細胞肺癌的侵襲轉移發(fā)揮上調(diào)作用。因此,本課題詣在證實Diversin對膀胱癌組織發(fā)生發(fā)展侵襲轉移發(fā)揮的功能,此外在細胞水平上,對其促進腫瘤侵襲轉移,發(fā)生發(fā)展的表型及其分子機制進行初步研究。研究方法:本研究收集沈陽醫(yī)學院附屬中心醫(yī)院2009年1月~2015年12月收治的膀胱尿路上皮癌患者的術后標本作為研究對象。通過免疫組化的方法對其癌組織和癌旁組織中的Diversin的表達水平進行檢測。為了進一步證實Diversin在腫瘤的發(fā)生發(fā)展侵襲轉移等過程中的作用,本實驗以膀胱尿路上皮癌T24細胞作為實驗對象,利用瞬時轉染siRNA的方法對T24細胞中的Diversin的表達水平進行下調(diào),并通過蛋白印記發(fā)對下調(diào)的效果進行檢測。本課題采用MTS的方法對干擾組和對照組細胞的增殖能力進行檢測,并且根據(jù)MTS的結果繪制實驗組和對照組的生長曲線;利用Transwell侵襲實驗對實驗組和對照T24細胞的侵襲轉移能力進行初步檢測。為了研究Diversin促進腫瘤發(fā)生發(fā)展侵襲轉移的分子機制,同時基于本課題組的前期實驗結果,本實驗利用Western-blot方法對T24實驗組和對照組細胞中Wnt通路的Wnt/β-catenin經(jīng)典途徑和Wnt/JNK途徑中的關鍵蛋白β-catenin,JNK,p-JNK的表達水平進行檢測,繼而表征Wnt信號通路經(jīng)典途徑和JNK途徑的活性。結果:1、Diversin在膀胱癌組織中的表達水平顯著高于癌旁組織,且Diversin的表達主要定位于腫瘤細胞的胞漿與包膜處(p0.05)。2、下調(diào)Diversin的膀胱癌細胞T24細胞系的增殖能力顯著低于陰性對照組。3、下調(diào)Diversin的T24細胞系的侵襲能力顯著低于陰性對照組。4、下調(diào)Diversin的T24細胞中,磷酸化JNK與本底JNK表達量的比值顯著低于陰性對照組。結論:1、Diversin與膀胱癌的發(fā)生,惡性轉化,TNM分期,有無淋巴結轉移的病理因素呈正相關。2、Diversin可提高T24細胞系的增殖能力和侵襲轉移能力。3、Diversin可能通過激活T24細胞中Wnt信號通路的JNK途徑發(fā)揮其生物學功能。
【圖文】：

3 實驗結果3.1 Dviersin 在膀胱癌組織中的表達水平顯著高于癌旁組織為了證明 Diversin 在膀胱腫瘤中對細胞增殖，侵襲轉移等病例因素中發(fā)揮促進作用，本課題采用免疫組織化學方法檢測了收集的 40 例膀胱尿路上皮癌組織標本中 Diversin 中的表達水平進行檢測。在收集的膀胱尿路上皮癌的病歷資料當中，Diversin 呈陽性表達的病例有 38 例（陽性表達率為 95％）。同時免疫組織化學染色結果顯示，Diversin 只要在膀胱癌組織中細胞的胞漿和包膜中表達水平較高（圖 1B、C、D）。而在正常尿路上皮中 Diversin 呈現(xiàn)陰性表達（圖 1A）。以上結果進一步證實 Diversin 的表達水平與膀胱癌的惡性轉化，TNM 分期，有無淋巴結轉移的病理因素相關。

時轉染 Diversin 特異性小干擾 RNA 的手段對 T24 細胞中 Diversin 的表達水平進行下調(diào)，以無意義序列作為陰性對照。轉染 48h 后以 western-blot 的方法檢測Diversin 表達水平下調(diào)的效果，結果顯示轉膀胱癌 T24 細胞轉染特異性 siRNA 48h 后，Diversin 的水平表達與對照組相比顯著下降（圖 2A）。為了證實 Diversin 在膀胱癌 T24 細胞中對細胞增殖作發(fā)揮促進作用。 我們對轉染后的 T24 細胞進行 MTS 增殖能力檢測，，并對干擾組和對照組細胞繪制生長曲線。MTS 結果顯示，Diversin 干擾組 T24 細胞的增殖能力與陰性對照組細胞相比顯著降低（圖 2B），這一結果提示下調(diào) Diversin 的表達水平可降低 T24細胞的增殖能力為了探討 Diversin 對膀胱癌細胞侵襲轉移能力的調(diào)控作用，本實驗采用Transwell 的方法對 T24 細胞的干擾組和陰性對照組進行檢測。Transwell 結果顯示，陰性對照組 Transwell 小室下室染色的細胞數(shù)量顯著高于干擾組（圖 2 C,D），這一結果提示下調(diào) Diversin 的表達水平可降低 T24 細胞的侵襲能力。
【學位授予單位】：中國醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R737.14

【參考文獻】

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1 潘起晨;王明昊;班允超;崔曉;王運杰;;Diversin在人腦星形細胞瘤組織中的表達及其對腫瘤細胞增殖和侵襲的影響[J];山東醫(yī)藥;2015年20期

本文編號：2653605