【摘要】：背景與目的:糖尿病(Diabetes mellitus,DM)患者長期血糖控制不佳,可導致多種并發(fā)癥,如糖尿病腎病(Diabetic nephropathy,DN)。DN缺乏有效的干預措施,是導致終末期腎衰竭的主要原因,也是公認的衛(wèi)生難題。姜黃素是具有較高藥用價值的多酚類物質。沉默信息調節(jié)因子1(Silent information regulator 1,SIRT1)是一種在人類細胞中廣泛存在的組蛋白去乙酰化酶,在人腎小管上皮細胞(Human renal tubular epithelialccell,HK-2)中有較高表達。有研究發(fā)現(xiàn)姜黃素可通過激活SIRT1治療頭頸部鱗狀細胞癌[1],上調SIRT1對膽管結扎(BDL)致肝纖維化模型具有保護作用[2]。核因子κB(Nuclear factor-κB,NF-κB)是公認的促炎因子,存在有乙�；�、磷酸化、甲基化等修飾方式調控炎癥反應[3]。有研究者證實SIRT1可使NF-κB的亞基p65發(fā)生去乙酰化,從而減輕下游炎癥反應。由此,我們推測姜黃素(Curcumin)是否可通過上調SIRT1的表達抑制NF-κBp65乙酰化,從而拮抗高糖誘導的HK-2細胞的轉分化?本實驗擬研究高糖引起HK-2細胞轉分化及姜黃素的保護作用機制,從而為姜黃素應用于糖尿病腎病的治療提供實驗依據(jù),同時為糖尿病腎病的藥物治療提供新的思路和方向。材料與方法:取對數(shù)生長期的HK-2為實驗研究對象。(1)高糖對HK-2細胞轉分化的影響:實驗分組為正常對照組(5.5mmol/L)、高糖組(30mmol/L)、甘露醇組、高糖+SIRT1抑制劑組(EX527)。觀察指標:(1)細胞形態(tài)學;(2)Western Blot檢測各組E-cadherin、α-SMA和SIRT1蛋白的表達;(3)ELISA測定各組IL-1β表達。(2)不同濃度姜黃素對高糖引起HK-2細胞轉分化的影響:實驗分組為高糖組、高糖+姜黃素低濃度組(5μmol/L)、高糖+姜黃素中濃度組(10μmol/L)、高糖+姜黃素高濃度組(20μmol/L)。觀察指標:(1)細胞形態(tài)學;(2)Western Blot檢測各組E-cadherin、α-SMA、SIRT1和乙�；疦F-κBp65蛋白的表達;(3)ELISA測定各組IL-1β表達。(3)SIRT1的表達對HK-2細胞轉分化的影響:實驗分組為高糖組、高糖+姜黃素組(20μmol/L)、高糖+姜黃素+SIRT1抑制劑組。觀察指標:(1)Western Blot檢測各組E-cadherin、α-SMA、SIRT1和乙酰化NF-κBp65蛋白的表達;(2)ELISA測定各組IL-1β表達。結果:(1)正常對照組細胞為鋪路石樣,高糖組細胞呈長梭形改變,與正常對照組相比,E-cadherin、SIRT1蛋白表達減少,α-SMA和IL-1β的表達增多;高糖+SIRT1抑制劑組細胞形態(tài)長梭形改變更加明顯,與高糖組相比,E-cadherin、SIRT1蛋白表達更少,α-SMA和IL-1β的表達更多;甘露醇組與正常對照組細胞形態(tài)、E-cadherin、SIRT1、α-SMA、IL-1β的表達均無明顯差異。說明高糖可誘導HK-2細胞發(fā)生腎小管上皮細胞-間充質轉分化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)。(2)高糖+低/中/高濃度姜黃素組與高糖組對比,HK-2長梭形改變減輕,隨著姜黃素濃度增加,E-cadherin、SIRT1蛋白表達上升,α-SMA、乙�；疦F-κBp65、IL-1β的表達下降,且高糖+姜黃素高濃度組(20μmol/L)組效果最明顯。說明姜黃素可減輕高糖環(huán)境對HK-2細胞的EMT。(3)姜黃素處理可拮抗高糖對HK-2細胞的損傷,SIRT1抑制劑與姜黃素共處理后姜黃素的拮抗作用減弱。表明姜黃素通過上調SIRT1表達減輕高糖環(huán)境導致HK-2細胞的EMT。結論:(1)高糖可誘導HK-2細胞發(fā)生EMT。(2)姜黃素可通過上調SIRT1的表達減輕高糖誘導的HK-2細胞EMT。
【圖文】：

3.1.2 高糖影響 HK-2 細胞 EMT 相關蛋白的表達CD圖 3.1 高糖對 HK-2 細胞形態(tài)學影響注：A 正常對照組 B 高糖組 C 甘露醇組 D 高糖+SIRT1 抑制劑組顯微鏡放大倍數(shù)：10×40

圖 3.2 高糖對 HK-2 細胞內 E-cadherin 和 α-SMA 蛋白的影響（ x±s，n=3）注：A 組：正常對照組，B 組：高糖組，，C 組：甘露醇組，D 組：高糖+SIRT1 抑制劑a:與 A 組比較，P<0.05；b:與 B 組比較，P<0.05圖 3.2 (A)圖 3.2 (B)
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R587.2;R692.9

【參考文獻】

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1 余益本;吳移謀;文格波;楊文瓊;;鹽酸吡格列酮對糖尿病大鼠腎組織TLR4表達的影響[J];細胞與分子免疫學雜志;2014年08期

2 Desirée Luis-Rodríguez;Alberto Martínez-Castelao;José Luis Górriz;Fernando de lvaro;Juan F Navarro-González;;Pathophysiological role and therapeutic implications of inflammation in diabetic nephropathy[J];World Journal of Diabetes;2012年01期

3 李貞瓊;劉建社;全正莉;;氯沙坦對實驗性糖尿病大鼠腎臟的炎癥抑制作用[J];中國中西醫(yī)結合腎病雜志;2007年10期

本文編號：2614722