【摘要】：背景:膀胱癌(Bladder Cancer BC)是膀胱上皮組織起源的惡性腫瘤,在我國,膀胱癌發(fā)病率位列泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤中的第一位,而在國外,其發(fā)病率僅次于前列腺癌,是泌尿生殖系統(tǒng)中最常見的惡性腫瘤,且為全身十大惡性腫瘤之一。雖然隨著醫(yī)療技術及醫(yī)療手段的不斷豐富,但是針對膀胱癌治療的有效手段卻仍然十分缺乏。目前,主要通過手術切除早期及中期膀胱癌原發(fā)病灶,但術后依然具有較高的復發(fā)風險。而對于晚期膀胱癌患者,由于往往已經侵犯臨近組織或出現淋巴結轉移等,手術治療已經不能切除病灶,因此多采用放療、化療或免疫療法等姑息性治療措施,治療過程中死亡率高且造成患者沉重的經濟及心理負擔。根據流行病學調查,膀胱癌的發(fā)病率正逐年上升,已成為嚴重危害人類生命健康的重大公共衛(wèi)生問題。然而,膀胱癌的病因非常復雜,其不僅存在自身的遺傳因素,同時也有環(huán)境因素的影響。得益于基因測序工作的深入研究,從而快速精確的獲得了基因間相互聯系、相互調控的海量數據,揭示了基因與基因之間或基因產物之間存在的邏輯關系,闡明基因表達調控并不是單一孤立的存在,而是相互關聯,相互制約。因此,通過進一步研究膀胱癌發(fā)生發(fā)展過程中分子生物學機制,探索膀胱癌診療新靶點,具有重要的臨床實際意義。長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA lncRNA)是一種從基因組轉錄出來的長度超過200nt的RNA分子,但是lncRNA分子卻并不會通過翻譯編碼蛋白而發(fā)揮作用,在以往研究中被認為是轉錄過程中的噪音而不被重視。隨著基因研究工作的深入進展,lncRNA重新被人們所認識,大量研究報道lncRNA在基因的表達調控方面發(fā)揮重要作用,參與腫瘤等疾病發(fā)生發(fā)展的過程,并發(fā)揮重要的調控作用�；蜷g長鏈非編碼RNA(long intergenic non-coding RNA lincRNA)就是存在于基因間的一種長鏈非編碼RNA,與腫瘤等疾病的內在分子機制聯系十分密切。谷氨酰胺代謝活動被認為是癌癥的一個重要的顯著特征,癌細胞通過谷氨酰胺代謝活動獲得能量和營養(yǎng)物質,以支持癌細胞的生長和增殖。另外,谷氨酰胺代謝受到細胞內一些致癌基因或抗癌基因的影響,而谷氨酰胺酶(glutaminase GLS)是調節(jié)谷氨酰胺代謝過程中的關鍵酶。因此,研究長鏈非編碼RNA對谷氨酰胺酶的影響可能會發(fā)現膀胱癌診斷和治療的潛在新靶點,但這仍需要通過客觀的科學實驗及臨床實踐進一步驗證。目的:研究lincRNA-p21在膀胱癌組織標本及細胞系中的表達及其生物學功能,探索lincRNA-p21影響膀胱癌生物學功能的作用機制。方法:通過實時定量PCR技術(qRT-PCR)實驗方法檢測lincRNA-p21及谷氨酰胺酶在膀胱癌組織標本及膀胱癌細胞系中的表達水平。使用特異性靶向lincRNA-p21及GLS的小干擾RNA(siRNA)及過表達質粒載體轉染膀胱癌細胞系,CCK、克隆形成實驗驗證膀胱癌細胞生長增殖情況,并通過qRT-PCR、Western blot檢測谷氨酰胺酶的表達及代謝物測定方法測定谷氨酰胺代謝產物。結果:在膀胱癌組織標本中,lincRNA-p21的表達水平與其匹配的癌旁正常組織相比明顯下降(P0.01),而相反,GLS表達水平顯著高于配對癌旁組織(P0.01)。過表達lincRNA-p21能顯著性抑制膀胱癌細胞增殖(P0.05)及生長(P0.01),且抑制谷氨酰胺酶表達(P0.05),從而抑制谷氨酰胺代謝水平降低(P0.05),代謝產物下降(P0.05)。相反,沉默lincRNA-p21會促進膀胱癌細胞增殖(P0.05)及生長(P0.01),且促進谷氨酰胺酶表達(P0.05),從而促進谷氨酰胺代謝水平升高(P0.05),代謝產物增多(P0.05)。結論:lincRNA-p21在膀胱癌細胞系及膀胱癌組織標本中的表達水平相對較低,提示可能與抑癌作用有關,具有抑制膀胱癌細胞增殖生長的生物學作用,參與膀胱癌細胞生長增殖過程中的生物學調控等,在膀胱癌中有著抑癌基因的作用�？赡艹蔀闈撛诘陌螂装┰\療新靶點,為膀胱癌診療提供有利的研究方向。
【圖文】：

且具有明顯的統(tǒng)計學差異（圖1A）。圖 1 膀胱癌組織中 LincRNA-p21 與谷氨酰胺酶表達水平。（A、C）利用 qRT-PCR 方法檢測 LincRNA-p21在膀胱癌組織（n=11）和正常組織（n=7）中的相對表達水平。（B、D）利用 qRT-PCR 方法檢測 LincRNA-p21在膀胱癌組織及其配對癌旁正常組織（n=6）中的相對表達水平。誤差線：平均值±標準誤，**表示 P＜0.01，***表示 P＜0.001。

安徽醫(yī)科大學碩士學位論文3A、D），，表明 lincRNA-p21 過表達后顯著降低了 BIU87 細胞的增殖能力。另外，克隆形成實驗結果表明，實驗組中的膀胱癌細胞系生長能力較對照組明顯降低，量化結果顯示實驗組與對照組結果具有顯著的統(tǒng)計學意義（圖 3B、3C），表明lincRNA-p21 降低了 BIU87 細胞的集落形成能力。同時，在對照組和 lincRNA-p21過表達的 5637 穩(wěn)轉株細胞系中，我們也觀察到了與 BIU87 細胞系相一致的結果（圖 3D、3F）。
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R737.14

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本文編號：2614043