【摘要】：背景與目的：IgA腎病(IgA Nephropathy, IgAN)是終末期腎病的主要成因之一,早期的診斷和治療對防止或延緩IgAN病情進展至關(guān)重要。已有研究表明,微小RNA (microRNAs, miRNAs)在IgAN的發(fā)病和進展中扮演重要角色,IgAN患者尿沉渣中miR-146a、miR-155、miR-93等miRNAs的表達水平較健康對照組變化非常顯著,很有可能成為檢測IgAN的一類新型無創(chuàng)標志物。然而目前國內(nèi)外尚無對IgAN患者尿沉渣中完整miRNAs表達譜的報道。因此,本研究旨在通過檢測尿沉渣miRNAs表達譜,尋找在IgAN中差異表達的miRNAs,評估其診斷性能及與臨床指標的相關(guān)性,并通過生物信息學(xué)分析初步探討其在IgAN中可能的作用。方法：本研究設(shè)計了篩選隊列和驗證隊列,納入解放軍總醫(yī)院腎臟病科2013年12月至2015年1月首次經(jīng)腎活檢證實的IgAN患者、膜性腎病(membranous nephropathy, MN)患者和微小病變腎病(minimal changes disease, MCD)患者,其中MN和MCD患者作為疾病對照組,同時設(shè)立健康對照組。采集晨尿標本,通過離心法提取尿沉渣。(1)采用Affymetrix miRNA 4.0芯片檢測篩選隊列尿沉渣miRNAs的表達譜,通過芯片顯著性分析比較各組miRNAs的表達差異。采用實時定量PCR (real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)去重新檢測篩選隊列樣本。(2)采用RT-qPCR法檢測驗證隊列尿沉渣差異miRNAs的表達,繪制受試者作業(yè)特征曲線(receiver operating characteristic curve, ROC)評估差異miRNAs診斷IgAN的特異度和敏感度。(3)采用生物信息學(xué)軟件miRWalk對差異miRNAs進行靶基因預(yù)測,并應(yīng)用DAVID在線分析軟件對預(yù)測的靶基因進行GO功能和KEGG通路富集分析。結(jié)果：篩選隊列納入了18例IgAN患者(其中Lee氏分級Ⅰ-Ⅱ級、Ⅲ級和Ⅳ-V級患者各6例)、4例MN患者、4例MCD患者和6例健康受試者;驗證隊列納入了102例IgAN患者、41例MN患者、27例MCD患者和34例健康受試者。(1)在篩選隊列中,miRNA芯片結(jié)果顯示：IgAN組與健康對照(healthy control,HC)組、MN組和MCD組相比,分別有117種、78種和11種miRNAs的表達有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05且差異倍數(shù)2或0.5),但差異miRNAs之間無交集。在IgAN Ⅰ-Ⅱ級組和IgAN Ⅲ級組,分別有4種niRNAs(miR-223-3p、miR-629-5p、 miR-3613-3p和miR-4668-5p)和6種niRNAs(miR-150-5p、miR-371b-5p、miR-572.miR-3613-3p、miR-4668-5p和miR-6750-5p)與各對照組相比的表達差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05且差異倍數(shù)2或0.5)。RT-qPCR結(jié)果初步驗證了其中7種miRNAs的表達(miR-150-5p、miR-223-3p、miR-3613-3p、miR-371b-5p、miR-4668-5p、miR-572和miR-629-5p)。(2)在驗證隊列中,RT-qPCR結(jié)果顯示：與HC組、MN組、MCD組相比,IgAN組miR-150-5p的表達水平顯著升高(P0.05),ROC曲線下面積可達0.817,敏感度和特異度分別為64.2%和84.8%;miR-3613-3p的表達水平則顯著降低(P0.01),ROC曲線下面積為0.8,敏感度和特異度分別為67.4%和92.8%。Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示miR-3613-3p的表達水平與24h尿蛋白定量和Lee氏分級呈正相關(guān),與腎小球濾過率呈負相關(guān),并且在牛津分型為S0的亞組中表達水平顯著低于S1亞組。(3)生物信息學(xué)分析的結(jié)果顯示：miR-150-5p預(yù)測的靶基因功能在細胞增殖、淋巴細胞的分化、活化和免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)等方面有顯著富集,KEGG信號通路主要富集在Wnt和MAPK通路。miR-3613-3p預(yù)測的靶基因主要參與調(diào)控糖代謝和轉(zhuǎn)運、B細胞的活化等方面,并且在Wnt通路也具有顯著富集。結(jié)論：IgAN患者尿沉渣miRNAs表達譜出現(xiàn)了顯著變化,其中miR-150-5p和miR-3613-3p的表達水平具有一定特異性,對IgAN的診斷具有一定提示作用,并且miR-3613-3p的表達水平有助于評估患者的病情嚴重程度,有望成為監(jiān)測IgAN的無創(chuàng)指標。生物信息學(xué)分析顯示miR-150-5p和miR-3613-3p有可能通過調(diào)節(jié)機體免疫反應(yīng)而參與IgAN的發(fā)病機制。
【圖文】：

逡逑如維恩圖所示（圖１－３－３），在ＩｇＡＮ組中，有６種ｍｉＲＮＡｓ與ＭＮ和ＭＣＤ組逡逑相比表達均有統(tǒng)計學(xué)差異（尸＜０．０５且ＦＣ〉２或＜０．５），分別為：ｍｉＲ－３７８ｂ、ｍｉＲ－逡逑１２４－３ｐ、ｍｉＲ－３０６５－３ｐ、ｍｉＲ－４２９、ｍｉＲ－３３５－５ｐ邋和邋ｍｉＲ－２１５－５ｐ；有邋７邋種邋ｍｉＲＮＡｓ邋與邋ＭＮ逡逑和ＨＣ組相比表達均有差異（Ｐ＜邋０．０５且ＦＣ〉２或＜０．５），分別為：ｍｉＲ－１５０－５ｐ、逡逑ｍｉＲ－２５－３ｐ，邋ｍｉＲ－１７－３ｐ、ｍｉＲ－４２５－５ｐ、ｍｉＲ－Ｉ３０ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－２Ｍ－３ｐ邋和邋ｍｉＲ－２６ｂ－５ｐ；但逡逑上述差異ｍｉＲＮＡｓ之間無交集。逡逑ＩｇＡＮ邋ｖｓ邋ＭＮ邋ＩｇＡＮ邋ｖｓ邋ＭＣＤ逡逑，

本文編號：2543654