【摘要】：[目的]DDX39是RNA解旋酶DEAD-Box家族成員之一,它在體內(nèi)通過調(diào)節(jié)基因表達和RNA代謝來發(fā)揮識別天然免疫功能、調(diào)節(jié)胞內(nèi)信號通路、RNA轉(zhuǎn)錄與剪切以及調(diào)控核內(nèi)表觀遺傳學(xué)等重要作用。而在不同腫瘤的調(diào)控過程中DDX39可以發(fā)揮抑癌或者促癌作用。DDX3 9在腎透明細胞癌(Clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)中發(fā)揮的功能以及與患者臨床預(yù)后相關(guān)性尚需要進一步研究。通過我們的研究將為腎癌增殖轉(zhuǎn)移的形成提供新的理論依據(jù),為腎癌治療尋找新的基因靶點,并且探索一種可以預(yù)測腎癌患者療效和預(yù)后的新型分子標(biāo)志物。[研究方法]1、通過Oncomine生物信息數(shù)據(jù)庫,初步驗證DDX39在腎透明細胞癌中的表達以及與預(yù)后關(guān)系。采用實時定量PCR(Real-time PCR,RT-PCR)和蛋白免疫印跡(Western-blot)技術(shù)進一步驗證腎透明細胞癌的癌旁組織與癌組織、腎癌細胞株與正常腎小管上皮細胞株之間mRNA及蛋白表達的差異性。2.免疫組化染色腎透明細胞癌組織芯片,分析DDX39在腎透明細胞癌中的表達與患者預(yù)后相關(guān)性。3、利用siRNA (small interfering RNA)干擾和質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù),分別敲低和過表達腎癌細胞株中的DDX39,通過RT-PCR和Western-blot驗證干擾和轉(zhuǎn)染效率,最終構(gòu)建DDX39低表達和過表達的腎癌細胞株。采用CCK8法增殖實驗、平板克隆實驗、Transwell細胞遷移實驗、細胞侵襲實驗等來驗證DDX39低表達和過表達時腎癌細胞株的增殖、轉(zhuǎn)移能力。[結(jié)果]1、通過Oncomine數(shù)據(jù)庫檢索分析以及標(biāo)本驗證,結(jié)果顯示DDX39在腎透明細胞癌中呈高表達,癌旁組織與癌組織、腎癌細胞株與正常腎小管上皮細胞株之間DDX39表達差異明顯。2.DDX39表達量與腫瘤的大小、TNM分期以及遠處轉(zhuǎn)移相關(guān),單因素和多因素分析DDX39表達量與腎癌患者總生存期和無病生存期預(yù)后關(guān)系,DDX39可以作為腎癌預(yù)后獨立的預(yù)測因子,其表達量越高患者預(yù)后越差。3.用siRNA干擾技術(shù)和質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù)可以有效的敲低和過表達腎癌細胞株中DDX39。體外細胞功能實驗結(jié)果顯示,腎癌細胞株敲低DDX39后,細胞增殖和轉(zhuǎn)移能力被抑制,而過表達DDX39后,腎癌細胞增殖和轉(zhuǎn)移能力增強。[結(jié)論]DDX39在腎透明細胞癌中呈現(xiàn)原癌基因的特性,可以促進腫瘤增殖和轉(zhuǎn)移。DDX39有望成為預(yù)測腎癌預(yù)后的新型分子標(biāo)志物以及成為腎癌基因靶向治療的新靶點。
【圖文】：

圖１－１邋ＤＤＸ３９邋ｍＲＮＡ在腎癌組織與正常腎組織間表達差異的Ｍａｔａ分析結(jié)果，逡逑ｐ邋?

Ｔｈｅ邋ｒａｎｋ邋ｆｏｒ邋ａ邋ｇｅｎｅ邋ｉｓ邋ｔｈｅ邋ｍｅｄｉａｎ邋ｒａｎｋ邋ｆｏｒ邋ｔｈａｔ邋ｅｅｎｅ邋ａｃｒｏｓｓ邋ｅａｃｈ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ａｎａｌｙｓｅｓ．逡逑Ｔｈｅ邋ｐ－Ｖａｌｕｅ邋ｆｏｒ邋ａ邋ｇｅｎｅ邋ｉｓ邋ｉｔｓ邋ｐ－Ｖａｌｕｅ邋ｆｏｒ邋ｔｈｅ邋ｍｅｄｉａｎ－ｒａｎｋｅｄ邋ａｎａｌｙｓｉｓ．逡逑圖１－１邋ＤＤＸ３９邋ｍＲＮＡ在腎癌組織與正常腎組織間表達差異的Ｍａｔａ分析結(jié)果，逡逑ｐ邋＜０？邋００１逡逑２．從Ｏｎｃｏｍｍｅ數(shù)據(jù)庫中共獲得７２例透明細胞癌標(biāo)本的臨床信息，根據(jù)ＤＤＸ３９樣本逡逑中的ｍＲＮＡ表達量高低分成ＤＤＸ３９高表達組（高于中位表達量，ｎ＝３６）和ＤＤＸ３９低表逡逑達組（低于中位表達量，ｎ邋＝邋３６）。利用Ｋａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ生存分析法對比ＤＤＸ３９高表達組與逡逑低表達組生存差異，雖然結(jié)果沒有統(tǒng)計學(xué)意義（Ｐ＝０．０７１），，但是從生存曲線可以看出逡逑ＤＤＸ３９高表達組較低表達組有著更差的預(yù)后趨勢。逡逑＿邋１００－ｋｗ．．Ｊ？Ｕ）｜邋Ｌｏｗ邋ＤＤＸ３９逡逑嘗邐＊－１，邐ｉ－ｕ＊！．，邋ｎ＝３６逡逑Ｉ邐‘■？邋？邋？邋？邋Ｌ邋Ｌ邋—邋—邋—？逡逑３邐１邋邐邐ｕ￣逡逑＝５０－邐ｎ＝３６邐——－逡逑２邐Ｈｉｇｈ邋ＤＤＸ３９逡逑０逡逑＞逡逑°邐ｐ＝０．０７１逡逑0－ｌ邐１邐１邐１邐１逡逑０邐１０００邐２０００邐３０００邐４０００逡逑Ｆｏｌｌｏｗｕｐ邋Ｔｉｍｅ（Ｄａｙｓ）逡逑圖１－２邐Ｏｎｃｏｍｉｎｅ數(shù)據(jù)庫ＤＤＸ３９高表達組與低表達組間總體生存期差異
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.11

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本文編號：2535288