【摘要】：目的： 1.研究人骨髓間充質(zhì)干細胞對人前列腺癌PC-3細胞系及22RV1細胞系增殖,遷移,侵襲及血管生成擬態(tài)等生物學特性的影響,并初步探討其影響血管生成擬態(tài)過程中的相關(guān)分子機制； 2.利用免疫磁珠法從人前列腺癌PC-3細胞株中分選人前列腺癌類干細胞,并鑒定其相應生物學特性； 3.探討過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)的配體羅格列酮對前列腺癌PC-3細胞系增殖,遷移,侵襲及血管生成擬態(tài)的影響,并初步探討其相關(guān)分子機制。 方法： 1.體外培養(yǎng)人前列腺癌PC-3細胞系及22RV1細胞系,應用CCK-8法觀察人骨髓間充質(zhì)干細胞對前列腺癌細胞增殖的影響；通過體外劃痕實驗及侵襲實驗觀察人骨髓間充質(zhì)干細胞對前列腺癌細胞遷移及侵襲的影響；體外建立matrigel三維培養(yǎng)系統(tǒng),觀察人骨髓間充質(zhì)干細胞對前列腺癌細胞血管生成擬態(tài)(vasculogenic mimicry, VM)形成的影響。通過裸鼠皮下成瘤實驗觀察人骨髓間充質(zhì)干細胞對前列腺癌細胞體內(nèi)成瘤及血管生成擬態(tài)形成的影響。人骨髓間充質(zhì)干細胞干預前列腺癌細胞后通過RT-PCR及western blot等方法觀察其CXCR4的表達變化,并通過CXCR4抑制劑AMD3100、PI3K抑制劑LY294002及慢病毒介導的RNA干擾技術(shù)研究SDF-1/CXCR4軸及PI3K/Akt通路在該過程中的作用； 2.利用免疫磁珠法從人前列腺癌PC-3細胞株中分選出CD133+/CD44+細胞,通過免疫組化、流式細胞術(shù)、CCK8及平板克隆形成實驗鑒定其表面標志物表達情況及腫瘤干細胞相關(guān)特性,通過裸鼠皮下成瘤實驗研究分選前后細胞體內(nèi)成瘤能力； 3.體外培養(yǎng)人前列腺癌PC-3細胞系,應用CCK-8法觀察羅格列酮不同濃度和不同作用時間對前列腺癌PC-3細胞增殖的影響；通過體外劃痕實驗及侵襲實驗觀察羅格列酮對PC-3細胞遷移及侵襲的影響；體外建立matrigel三維培養(yǎng)系統(tǒng),觀察羅格列酮對PC-3細胞血管生成擬態(tài)形成和VEGF產(chǎn)生的影響；并通過RT-PCR及western blot等方法觀察研究VEGF及PI3K/Akt通路在該過程中的作用。 結(jié)果： 1.人骨髓間充質(zhì)干細胞可促進前列腺癌PC-3細胞增殖、遷移及侵襲；前列腺癌PC-3細胞和22RV1細胞在體外三維培養(yǎng)條件下能夠形成形成環(huán)狀和網(wǎng)絡樣結(jié)構(gòu)。骨髓間充質(zhì)干細胞可在體外實驗及裸鼠體內(nèi)試驗中可促進前列腺癌細胞血管生成擬態(tài)的形成。人骨髓間充質(zhì)干細胞上調(diào)了兩種前列腺癌細胞系CXCR4的表達,慢病毒介導的RNA干擾技術(shù)抑制CXCR4表達后可抑制兩種細胞血管生成擬態(tài)形成。CXCR4抑制劑AMD3100和P13K抑制劑LY294002可阻斷人骨髓間充質(zhì)干細胞或SDF-1誘導的血管生成擬態(tài)形成； 2.經(jīng)免疫磁珠法分選所得CD133+/CD44+細胞比例為0.50%；免疫組化及流式顯示其CD44/CD133/整合素Q2β1均高表達；其細胞增殖和克隆形成率高于PC-3細胞；以低密度注射時,其裸鼠體內(nèi)成瘤率明顯高于PC-3細胞； 3.羅格列酮可明顯抑制前列腺癌PC-3細胞增殖、遷移及侵襲。同時羅格列酮可抑制前列腺癌PC-3細胞在體外三維培養(yǎng)條件下形成環(huán)狀和網(wǎng)絡樣結(jié)構(gòu),并抑制其VEGF mRNA表達及蛋白水平分泌。羅格列酮能夠抑制PC-3細胞Akt磷酸化。 結(jié)論： 1.人骨髓間充質(zhì)干細胞可促進前列腺癌細胞增殖、遷移、侵襲及血管生成擬態(tài)形成；人骨髓間充質(zhì)干細胞促進前列腺癌細胞血管生成擬態(tài)形成可能是通過上調(diào)其CXCR4表達并激活PI3K/Akt通路起作用的； 2.利用免疫磁珠法可從人前列腺癌細胞株P(guān)C3中高效的分選出具有腫瘤干細胞生物學特性的前列腺癌類干細胞,為下一步研究打下堅實基礎； 3.過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)的配體羅格列酮可有效抑制前列腺癌PC-3細胞增殖、遷移、侵襲及血管生成擬態(tài)形成；羅格列酮抑制前列腺癌細胞血管生成擬態(tài)形成可能是通過下調(diào)其VEGF表達并抑制PI3K/Akt通路起作用的。
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【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R737.25

【參考文獻】

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本文編號：2469682