【摘要】：【目的】本課題觀察甲烷飽和鹽水對(duì)于小鼠腎缺血再灌注損傷是否存在保護(hù)作用。并初步探討其是否通過降低氧化應(yīng)激、降低巨噬細(xì)胞向腎組織的趨化、抑制巨噬細(xì)胞分泌細(xì)胞因子、降低炎癥反應(yīng)以及抑制腎小管上皮細(xì)胞凋亡來發(fā)揮其保護(hù)作用�！痉椒ā�1.48只小鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為六組:假手術(shù)組(Sham組)、甲烷飽和鹽水組(MS組)、腎缺血再灌注組(RIR組)、腎缺血再灌注甲烷飽和鹽水10ml/kg組(RIR+MS 10組)、腎缺血再灌注甲烷飽和鹽水20ml/kg組(RIR+MS 20組)、腎缺血再灌注甲烷飽和鹽水40mg/kg組(RIR+MS 40組),每組8只。其中RIR組和RIR+MS各劑量組小鼠采用雙側(cè)腎蒂夾閉45min的方法建立腎缺血再灌注模型。Sham組和MS組僅剖腹,不做其它操作。RIR+MS 10組、RIR+MS 20組、RIR+MS 40組和MS組在關(guān)腹后即刻分別經(jīng)腹腔注射甲烷飽和鹽水10ml/kg、20ml/kg、40ml/kg和20ml/kg。Sham組和RIR組在同樣時(shí)間分別腹腔注射生理鹽水20ml/kg。再灌注(或關(guān)腹后)24h取材,檢測(cè)血清肌酐和尿素氮水平,同時(shí)取腎臟行病理學(xué)檢查。2.24只小鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為四組:Sham組、MS組、RIR組和RIR+MS組,每組6只。每組處理方法同前,選擇20 ml/kg作為本部分實(shí)驗(yàn)的給藥劑量。再灌注后24h取腎組織檢測(cè)MDA濃度及SOD、CAT和MPO活性水平。3.32只小鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為四組:Sham組、MS組、RIR組和RIR+MS組,每組8只。每組處理方法同前,選擇20 ml/kg作為本部分實(shí)驗(yàn)的給藥劑量。再灌注后24h取腎組織測(cè)定MCP-1 mRNA的表達(dá)水平。同時(shí)取腎臟制備單細(xì)胞懸液,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)巨噬細(xì)胞數(shù)量。ELISA法檢測(cè)血清中TNF-α、IL-6、IL-1β和IL-10濃度。4.在體實(shí)驗(yàn)中,24只小鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為四組:Sham組、MS組、RIR組和RIR+MS組,每組6只。每組處理方法同前,選擇20 ml/kg作為本部分實(shí)驗(yàn)的給藥劑量。再灌注后24h取腎臟進(jìn)行TUNEL染色。離體實(shí)驗(yàn)中,將HK-2細(xì)胞也分為4組:對(duì)照組(Sham組)、甲烷飽和鹽水組(MS組)、缺氧復(fù)氧模型組(HR組)和缺氧復(fù)氧模型甲烷飽和鹽水組(HR+MS組)。復(fù)氧24h后收集細(xì)胞使用Western blot法檢測(cè)caspase 3蛋白表達(dá)水平�！窘Y(jié)果】1.再灌注后24h,與Sham組比較,MS組、RIR+MS 20組及RIR+MS 40組小鼠血肌酐水平均無明顯變化(P均大于0.05),而RIR組和RIR+MS 10組小鼠血肌酐水平則顯著升高(p值均小于0.01);與rir組比較,rir+ms10組、rir+ms20組及rir+ms40組小鼠血肌酐水平均明顯降低(p均小于0.01)。再灌注24h,與sham組比較,ms組小鼠血清尿素氮水平無明顯變化(p0.05),rir組、rir+ms10組、rir+ms20組及rir+ms40組小鼠血清尿素氮水平則顯著升高(p均小于0.05);而與rir組比較,rir+ms10組、rir+ms20組及rir+ms40組小鼠血清尿素氮水平均顯著降低(p均小于0.01)。腎臟he染色顯示,sham組和ms組小鼠腎組織中腎小管上皮細(xì)胞排列整齊,刷狀緣完整,基底膜完整,腎小管中無管型無管腔堵塞;rir組則可見腎小管上皮細(xì)胞片狀和灶狀壞死,從基底膜上脫落,腎小管中可見管型及管腔堵塞,病變嚴(yán)重部位可見腎小管基底膜破壞;與rir組比較,rir+ms各劑量組腎小管上皮細(xì)胞片狀和灶狀壞死減少,病變程度較減輕,腎小管中管型少見,腎小管基底膜完整性較好。與rir+ms10組比較,rir+ms20組和rir+ms40組改善程度更為顯著。而rir+ms20組和rir+ms40組之間比較則差別不明顯。2.再灌注后24h,與sham組比較,ms組小鼠腎組織中mda濃度、sod活性、cat活性及mpo活性水平均無明顯變化;而rir組小鼠mda濃度顯著升高,sod活性和cat活性顯著降低,mpo活性顯著升高(p均小于0.01);rir+ms組小鼠腎組織mda水平與mpo活性均升高(p均小于0.05),而sod活性和cat活性無明顯變化(p均大于0.05)。與rir組比較,rir+ms組小鼠腎組織mda水平明顯降低,sod活性和cat活性顯著升高,mpo活性顯著降低(p均小于0.01)。3.再灌注后24h時(shí),與sham組比較,ms組小鼠腎組織中mcp-1的表達(dá)無明顯變化(p0.05),rir組和rir+ms組小鼠腎組織中mcp-1表達(dá)則顯著升高(p值均小于0.01);與rir組比較,rir+ms組小鼠腎組織中mcp-1表達(dá)顯著降低(p0.01)。而巨噬細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果顯示,與sham組比較,ms組和rir+ms組小鼠腎組織中巨噬細(xì)胞數(shù)量均無明顯變化(p均大于0.05),rir組小鼠腎組織中巨噬細(xì)胞數(shù)量則顯著升高(p0.01);與rir組比較,rir+ms組小鼠腎組織中巨噬細(xì)胞數(shù)量明顯降低(p0.01)。血清炎癥因子檢測(cè)結(jié)果顯示,與sham組比較,ms組小鼠血清tnf-α和il-6無顯著變化,il-10水平升高(p0.01),rir組和rir+ms組小鼠血清tnf-α、il-6和il-10水平則顯著升高(p均小于0.01);與rir組比較,rir+ms組小鼠血清tnf-α和il-6水平明顯降低,il-10水平顯著升高(p均小于0.05)。而各組間il-1β水平無明顯變化(p0.05)。4.再灌注后24h,與sham組小鼠比較,rir組小鼠腎臟tunel染色顯示腎組織中凋亡細(xì)胞顯著增多,而rir+ms組小鼠腎臟凋亡細(xì)胞數(shù)量較rir組顯著減少。而hk-2體外實(shí)驗(yàn)顯示建立體外缺氧復(fù)氧模型后,caspase3表達(dá)顯著上調(diào);而給予甲烷飽和鹽水處理后,caspase 3表達(dá)與HR組比較顯著下調(diào)。【結(jié)論】在關(guān)腹后即刻腹腔注射MS可顯著減輕小鼠腎缺血再灌注損傷。其保護(hù)作用可能與其抗氧化應(yīng)激、抑制巨噬細(xì)胞向缺血再灌注后的腎臟趨化、減輕機(jī)體炎癥反應(yīng)以及減少腎小管上皮細(xì)胞凋亡有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R692.5

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本文編號(hào)：2449734